论文部分内容阅读
目的:研究转化生长因子TGF-β1对于心室肌细胞动作电位时程(APD)的调控作用及其离子机制。 方法:(1)采用全细胞膜片钳技术，在HERG-HEK293细胞上，检测TGF-β1对于HERG电流的作用以及同时加入PKA抑制剂H89的作用;在急性分离的豚鼠心室肌细胞上检测TGF-β1对于IK1电流以及APD的作用。(2)采用WesternBlot技术，在HERG-HEK293细胞上以及原代培养的乳鼠心肌细胞上，检测TGF-β1对于HERG蛋白的作用以及同时加入PKA抑制剂H89的作用;在原代培养的乳鼠心肌细胞上，检测TGF-β1对于Kir2.1蚩白的作用以及同时加入PKA抑制剂H89的作用。(3)采用免疫荧光技术，在HERG-HEK293细胞上，检测TGF-β1对于HERG蛋白的作用以及同时加入PKA抑制剂H89的作用。(4)在HEK293细胞上，检测TGF-β1对于PKA活性的作用。 结果:(1)5ng/mL的TGF-β124小时可以明显的抑制HERG电流和IK1电流，而加入PKA抑制剂H89后可以明显的减弱这种抑制作用。(2)5ng/mL的TGF-β1可以明显的抑制HERG蛋白以及Kir2.1蛋白的表达，加入10μμM H89后可以减弱这种抑制作用。(3)在HERG-HEK293细胞中，5ng/mL的TGF-β124h可以明显的激活PKA活性。(4)在急性分离的豚鼠心肌细胞中，5ng/mL的TGF-β124h可以明显的延长APD（*p＜0.05 vs.Ctrl，＃p＜0.05 vs.TGF-β1孵育的细胞）。 结论:TGF-β1可以抑制HERG通道电流及蛋白含量的表达，TGF-β1同时也可以抑制IK1通道电流及其通道蛋白Kir2.1蛋白含量的表达，而PKA抑制剂H89可以减弱这种抑制作用。说明TGF-β1通过调节PKA的活性，抑制HERG及Kir2.1蛋白的合成，从而抑制HERG电流以及IK1电流，进而延长APD。