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腺病毒载体是肿瘤基因治疗的重要载体。条件复制型腺病毒(conditional replication adenovirus，CRAD)通过结合细胞表面的CAR受体(coxsackie adenovirus receptor)进入细胞内部，有选择性的在肿瘤细胞中复制并杀死肿瘤细胞。然而有些肿瘤细胞表面缺乏CAR受体，使腺病毒转染效率随着降低，因此，以腺病毒为载体的肿瘤基因治疗受到限制。将外源基因高效、安全地转入靶细胞是肿瘤基因治疗的关键。为了提高CRAD的转染效率，寻求简便、易于操作、适用范围广、转染效率高的技术方法具有重要意义。新型糖苷类药物具有许多的优越性，如具有良好的生物相容性，安全低毒，转染效率高，易于操作，适用范围广，对于提高腺病毒对肿瘤细胞的转染效率与广谱性具有重要的意义。然而，将新型糖苷类药物作为基因递送载体目前尚未见太多研究报道。 本研究在构建CRAD的基础上，通过筛选新型药物载体，进一步提高CRAD对肿瘤细胞的转染效率及杀伤作用，并深入探讨协同促进杀伤肿瘤细胞的作用机理。首先，以四种药物6-环己基甲基-β-D-麦芽糖苷（6-cyclohexylhexyl-β-D-maltoside，6-β-D）、正十二烷基-β-D-麦芽糖苷(n-Dodecyl-β-D-Maltoside，DDM)、DC-Chol、SDS为研究对象，联合腺病毒eGFP-Ad转染肿瘤细胞和正常细胞，以绿色荧光蛋白表达情况为评价标准，对转染效率进行统计分析。结果显示，新型糖苷类药物6-β-D和DDM能够促进eGFP-Ad对细胞的转染效率，与单独eGFP-Ad相比，转染效率分别提高18倍和16倍;6-β-D和DDM对肿瘤细胞HepG2和EC109的效率高达95％和85％，与DC-Chol和SDS相比，转染效率大幅提高，且用量少，对细胞安全无毒，是比较理想的新型药物载体;此外，与正常细胞相比，6-β-D和DDM能显著提高对肿瘤细胞的转染效率，二者达到极显著差异水平，预示可能在肿瘤靶向性治疗方面具有潜在的应用价值。 其次，研究糖苷类药物6-β-D协同CRAD对肿瘤细胞的杀伤作用。实验结果表明，CRAD对肿瘤细胞具有广谱性的杀伤作用，且对肿瘤细胞的杀伤效果与MOI及其作用时间呈正相关;MOI为30时，第五天观察，能够杀死90％以上的肿瘤细胞，尤其对食道癌和乳腺癌细胞杀伤效果更为显著;在6-β-D协同作用下，6-β-D联合MOI=10CRAD的杀伤效果可到达MOI30-50时对肿瘤细胞的杀伤效果，提示在临床上可以通过6-β-D的协同作用来降低病毒滴度，以达到较好的疗效。 最后，通过检测病毒复制能力、肿瘤细胞特异性启动子及Caspase3酶活变化探讨CRAD对肿瘤细胞杀伤机制。研究结果发现，6-β-D处理细胞中CRAD病毒复制倍数显著提高;CRAD感染肿瘤细胞中Caspase3酶活明显增强，提示CRAD可能是通过在肿瘤细胞中特异性复制和诱导细胞凋亡来杀伤肿瘤细胞。本课题为提高腺病毒在肿瘤基因治疗的临床应用提供技术支撑和理论依据。