论文部分内容阅读
研究背景:肝细胞癌(hepatocellular caicinoma,HCC)是最常见的恶性肿瘤之一。八十年代以来，对肝癌的研究取得了世人瞩目的成就，基础研究由整体和细胞水平进入到分子水平，亚临床肝癌的发现与手术切除，大幅度提高了肝癌的疗效。但由于肿瘤晚期、多中心疾病、肝功能储备差等原因，致使仅有少数患者适合手术切除，寻找新的治疗药物和治疗手段具有重要意义。介入治疗以其微创及可重复治疗的优点越来越受到人们重视，其中瘤内注射疗法以其经济、简便的优点具有较大的优势。
瘤内注射疗法中以经皮无水酒精注射疗法(percutaneous ethanol injection therapy，PEIT)最具代表性，它已成为肝癌治疗的有效手段且占有重要地位。无水酒精肝癌内注射使肝癌细胞脱水固定，蛋白质凝固变性，破坏肿瘤细胞，同时，肿瘤组织中的血管壁细胞变性、坏死、继而血栓形成，导致肿瘤缺血坏死。随后又相继成功开发了经皮瘤内醋酸注射、高温蒸馏水注射等瘤内注射疗法。
中药砷剂主要指砒霜和雄黄，前者主要成分是三氧化二砷(As2O3)，后者主要成分为硫化砷(As2S2)。上世纪中后期，我国学者使用As2O3治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)取得显著疗效。在此基础上，国内学者进一步扩大三氧化二砷研究及应用范围，发现它除对APL有突出疗效外，对实体瘤细胞如胃癌、肺癌、乳腺癌、肝癌等也显示良好的治疗效果。体外实。验和动物体内实验研究证明As2O3可以抑制多种肝癌细胞系的生长，能够抑制肝癌细胞的增殖，诱导细胞凋亡。As2O3用于临床肝癌治疗也取得了一定的疗效。体外实验研究证明As2S2可以抑制肝癌细胞系的生长。As2S2不同于As2O3的是它的溶解度差，但它的毒性比As2O3小。有研究表明As2S2通过诱导细胞凋亡和提高NK细胞活性对小鼠肝癌H22移植瘤发挥抗肿瘤作用。目前，由于As2S2水溶性差，临床上只限于口服给药和外用，不能静脉给药。
砷剂可抑制肝癌细胞增殖，诱导其凋亡，发挥抗癌作用，因此可以设想砷剂瘤内注射可发挥其灭瘤效果，且毒副作用小较全身用药小，无水酒精和砷剂联合瘤内注射可发挥协同作用杀灭肝癌细胞，提高单纯无水酒精瘤内注射灭瘤效果。
研究目的:本研究的目的旨在探讨无水酒精联合砷剂瘤内注射疗法在肝癌治疗中的应用价值，尝试为肝癌治疗提供一种新的可供选择的治疗手段。为此，本研究通过动物实验建立昆明小鼠腋部皮下肝癌移植瘤模型，评估无水酒精联合砷剂瘤内注射治疗肝癌的灭瘤效果及其可能的毒副反应，为临床应用奠定基础。
方法：复制100只小鼠H22肝癌实体瘤模型，接种14天后，用游标卡尺测量小鼠瘤径，选取瘤长径约1.0-1.2cm，短径约0.8-1.0cm的小鼠80只，随机80只小鼠分为四组(每组20只)：A生理盐水组、B无水酒精组、C酒精雄黄组、D酒精亚砷酸组，各组小鼠肿瘤内分别注射生理盐水、无水酒精、无水酒精雄黄混悬液、无水酒精亚砷酸溶液，注射量为0.2ml，其中C组每只小鼠雄黄用量为1.5mg，D组每只小鼠亚砷酸用量为40μg(约1.5μg/g)，共注射两周，每周两次。观察肿瘤生长率、各组瘤重及抑瘤率、小鼠生存时间、肝肾功能变化。
结果:1.肿瘤生长率：各组治疗后肿瘤体积均增大，有显著性差异。B、C、D组肿瘤生长率均低于A组，有统计学意义(P<0.01)；C组的肿瘤生长率低于B组，但无统计学意义(P>0.05)；D组的肿瘤生长率低于B组(P<0.01)和C组(P<0.05)，差异有统计学意义。
2.各组瘤重及抑瘤率：B、C、D组瘤重均低于A组，有统计学意义(P<0.01)。C组的瘤重低于B组，但两组比较无统计学意义(P>0.05)；D组瘤重低于B组(P<0.01)和C组(P<0.05)，有统计学意义。C组对A组及B组的相对抑瘤率分别为52.30％和24.14％，D组对A组及B组的相对抑瘤率分别为72.90％和56.90％。
3.肝肾功能检测：各组治疗前后ALT、AST、BUN、Cr变化无统计学意义(P>0.05)，Repeated Measures分析显示不同药物注射对ALT、AST、BUN、Cr变化的影响无显著性差异(组间两两比较均P>0.05)。
4.生存时间：B、C、D组存活时间均大于A组，有统计学意义(P<0.01)，C组和D组存活时间均大于B组，有统计学意义(P<0.05、P<0.01)；D组和C组存活时间无显著性差异(P>0.05)。
结论:本实验通过复制小鼠移植性肝癌模型，研究了无水酒精联合砷剂瘤内注射的疗效。结果表明无水酒精联合亚砷酸瘤内注射疗效优于单纯的无水酒精瘤内注射，可显著延长生存时间，且无明显的肝肾功能损害；无水酒精雄黄联合瘤内注射相对单纯无水酒精注射未表现出明显优势，但可延长小鼠生存时间。可能机制：无水酒精肝癌内注射使肝癌细胞脱水固定，蛋白质凝固变性，破坏肿瘤细胞，同时，肿瘤组织中的血管壁细胞变性、坏死、继而血栓形成，可减少对As2O3的血流冲刷，局部较高浓度As2O3旁渗可对周边瘤体起抑杀作用，As2O3可通过抑制肝癌细胞增殖，诱导肝癌细胞凋亡，抑制端粒酶活性，抗肝癌血管生成，调节免疫功能发挥抑瘤作用。As2S2在小鼠瘤内及体内可能转化成As2O3发挥抗肿瘤作用。