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目的：研究Twist2在人类卵巢癌组织的表达及意义,探讨其促进卵巢癌发生发展的可能机制,寻找Twist2参与调控细胞侵袭迁移的下游靶基因,为揭示Twist2促进卵巢癌发展转移的相关信号机制提供一定研究依据,并为卵巢癌转化医学治疗提供一个非常重要的新靶点。
方法：采用人卵巢癌组织芯片结合免疫组织化学染色检测,根据染色的强度和染色细胞的比例综合进行评分和统计,研究人类卵巢癌Twist2的表达情况。利用基因克隆和脂质体转染技术构建稳定过表达Twist2的人卵巢癌细胞株Twist2/SKOV3,采用MTT法、流式细胞仪、划痕实验等方法检测Twist2对细胞生长及迁移功能的影响,采用基因芯片技术对Twist2调控的下游基因进行系统地分析,并结合Real-time PCR和Western Blot加以验证。
结果：Twist2在正常卵巢组织中几乎不表达,在卵巢癌组织中表达明显升高,总阳性率达70.24％(59/84);并且,随着卵巢癌FIGO分期的增加,Twist2表达的阳性率和表达强度也随之增加,Ⅰ期时,Twist2表达强阳性率为22.73％(10/44),发展到Ⅳ期,肿瘤细胞的侵袭性最强,恶性程度最大,Twist2表达强阳性达53.85％(7/13),表明Twist2的表达与卵巢癌的恶性程度正相关。在不同类型卵巢癌组织中,Twist2表达强阳性在浆液性乳头状腺癌、粘液性乳头状腺癌、子宫内膜样癌、透明细胞癌中分别为:27.54％(19/69)、12.5％(1/8)、0％(0/2)、40％(2/5),各组无显著性差异,表明Twist2的表达与肿瘤组织类型无关。Twist2过表达时细胞形态也发生改变,细胞由原先的不规则多边形,聚集成团,铺石状排列,转变为梭形,成纤维样,且明显促进了细胞迁移和侵袭的能力,但是对细胞增殖无明显影响,提示Twist2可能参与了卵巢癌的EMT。Twist2的过表达使卵巢癌SKOV3细胞的E-cadherin、APC表达下调,N-cadherin、β-catenin、Claudin-1和Claudin-3表达上升,同时,细胞核内β-catenin表达增加,提示Twist2的过表达使E-cadherin的表达下调,从而使得E-cadherin/β-catenin复合体中的β-catenin游离出来,且APC的下调进一步使β-catenin降解减少,游离的β-catenin增加,并在胞浆积聚而进入细胞核增多,激活经典的Wnt/β-catenin/Tcf信号通路,启动靶基因Claudin-1、Claudin-3等的转录。另一方面,Twist2的过表达使卵巢癌SKOV3细胞的IL-6、P-STAT3(Tyr705)、MMP2、MMP9表达上升,推测Twist2的过表达可使IL-6的表达上调,激活STAT3,而活化的STAT3可借助核转运蛋白进入细胞核与特异的DNA序列结合启动靶基因MMP2、MMP9等的转录。
结论：Twist2在卵巢癌中表达显著增加,与卵巢癌的FIGO分期正相关,很可能作为临床卵巢癌高恶性度及预后不良的一个指征。Twist2可能通过两个通路参与卵巢癌EMT的发生:通过抑制E-cadherin表达激活经典的Wnt/β-catenin/Tcf信号通路,通过促进IL-6的表达而激活IL-6/STAT3信号通路,从而使Claudin-1、MMP-2、MMP-9等表达增加,促进卵巢癌细胞的侵袭转移。