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目的:观察针刀干预对帕金森病模型大鼠黑质神经炎症、神经细胞凋亡及相关因子的影响,并探讨JNK信号通路在针刀干预帕金森病中的作用机制。方法:雄性SD大鼠72只,分为空白组、假手术组、模型组、药物组、电针组和针刀组。采用单侧纹状体双靶点注射6-OHDA建立PD模型,通过阿朴吗啡(APO)诱发行为学检测验证模型。空白组不做任何处理;假手术组与模型组的注射方法和部位相同,仅注射等量的含0.2%维生素C的生理盐水;造模成功后,药物组美多芭片50mg/kg灌胃,电针组进行针刺治疗,针刀组给予针刀干预。治疗四周后各组取材检测,检测指标包括:(1)行为学检测:记录大鼠60min内旋转圈数;(2)HE染色观察黑质神经细胞形态学;(3)免疫荧光双标法检测黑质COX-2/TH,p-c-Jun/TH的表达;(4)Westernblot检测黑质JNK,P-JNK,p-c-Jun,COX-2及TH表达;(5)免疫组织化学检测黑质TH神经细胞;(6)Real-TimePCR检测黑质DATmRNA含量;(7)TUNEL染色检测凋亡细胞(8)免疫荧光双标法检测黑质Caspase-3/TH的表达(9)Westernblot检测黑质Caspase-3,Bcl-2,Beclin-1 的表达结果:(1)行为学检测:模型组出现旋转行为且治疗前后旋转圈数无差异(P>0.05);药物组、电针组、针刀组干预后大鼠旋转圈数明显减少,活动增多,干预前后有明显差异(P<0.01),与模型组相比差异显著(P<0.01)。(2)形态学检测:①HE染色:不同干预方法均可使HE染色黑质神经细胞数目增多,形态结构趋于正常,药物组黑质神经细胞排列有序,数量与模型组比较增多,细胞变性程度减轻,胶质细胞增生不明显;电针组黑质神经细胞数量与模型组比较增多较为明显,细胞变性程度明显减轻;针刀组黑质神经细胞数目与模型组比较明显增多,排列较密集,细胞变性减轻。②黑质TH的免疫组织化学染色:正常组和假手术组的黑质均可见密集的TH免疫反应阳性细胞,呈棕褐色,胞体较大,胞体主要为圆形或卵圆形,少数为多边形。模型组黑质可见少量、稀疏的TH免疫反应阳性神经元,胞体缩小,轮廓不清晰;药物组、电针组及针刀组TH免疫反应阳性神经元数量增多较为明显,胞体轮廓清晰可见,染色强度上亦有增加。③免疫荧光双标记黑质COX-2/TH,p-c-Jun/TH,Caspase-3/TH检测结果:正常组和假手术组的黑质均可见密集的TH免疫反应阳性细胞,呈绿色,胞体较大,胞体主要为圆形或卵圆形,同时,COX-2,p-c-Jun,Caspase-3/TH,呈红色荧光,在数量上和染色强度上表达较弱;模型组黑质可见少量、稀疏的TH免疫反应阳性神经元,呈绿色,细胞肿胀变性,或皱缩,数量较少,染色强度减低,同时,COX-2,p-c-Jun,Caspase-3,呈红色荧光,在数量上和染色强度上表达增加;药物组、电针组及针刀组TH免疫反应阳性神经元呈绿色,排列较有序,数量增多,胞体变性程度减轻,染色强度上亦有增加;同时,COX-2,p-c-Jun,Caspase-3/TH,呈红色荧光,较模型组,在数量上减少,染色强度减低。与电针组和药物组比较,针刀组TH神经元数目更多,胞体变性程度更轻;针刀组COX-2和p-c-Jun在数量上较电针组少,但比药物组多;药物组Caspase-3在数量上比电针组和针刀组少。(3)Western blot 检测结果:①与空白组比较,模型组大鼠黑质内JNK含量无明显差异(P>0.05);P-JNK,P-JNK/JNK,p-c-Jun表达升高(P<0.05),COX-2表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,药物组、电针组、针刀组大鼠黑质内JNK含量无明显差异(P>0.05);与模型组比较,P-JNK和p-c-Jun含量在药物组和电针组中有差异(P<0.05),针刀组具有显著差异(P<0.01),与模型组比,P-JNK/JNK在药物组,电针组和针刀组中有差异(P<0.05),COX-2含量电针组具有差异(P<0.05),在药物组和针刀组中有显著差异(P<0.01);②与空白组比较,模型组大鼠黑质内TH表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,药物组、电针组大鼠黑质内TH表达均升高(P<0.05),针刀组大鼠黑质内TH表达显著升高(P<0.01);③与空白组比较,模型组大鼠黑质内Caspase-3表达升高(P<0.05),Beclin-1表达显著升高(P<0.01),Bcl-2表达显著下降(P<0.01);与模型组比较,Caspase-3含量在药物组和电针组中降低(P<0.05),针刀组显著降低(P<0.01);Beclin-1含量在电针组表达降低(P<0.05),在药物组和针刀组中表达显著降低(P<0.01);Bcl-2在三组中表达均升高(P<0.05)。(4)Real time-PCR检测结果:与空白组比较,模型组大鼠黑质内DAT表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,药物组大鼠黑质内DAT表达显著升高(P<0.01),电针组和针刀组大鼠黑质内DAT表达均升高(P<0.05)。(5)TUNEL染色:与空白组比较,模型组大鼠神经元凋亡数显著增加(P<0.01);与模型组比较,药物组、电针组及针刀针组大鼠神经元凋亡数显著降低(P<0.01);结论:(1)针刀干预能有效减轻PD大鼠黑质神经元炎症反应,在JNK通路上,其可能通过降低COX-2/p-c-Jun的活性,降低JNK磷酸化水平,提高TH的抗氧化活性而发挥对神经元细胞保护作用。(2)针刀干预可使TH神经元形态改善、数量增多以及TH阳性细胞的表达增多,提高DAT的表达,从而发挥对神经元的保护作用。(3)针刀干预能有效的减轻PD大鼠黑质神经元的凋亡,其可能通过降低Caspase-3的促凋亡活性,激活Bcl-2的抗凋亡活性,抑制自噬基因Beclin-1活性,提高TH的抗氧化活性而发挥对神经元细胞保护作用。(4)对JNK信号的通路的抑制可能是针刀发挥作用的机制之一。