鹅Lb-FABP基因克隆及填饲对鹅Lb-FABP、Apo-B和Apo-A1基因表达的影响

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FABP旨肪酸结合蛋白,fatty-acid binding protein)、Apo-A1(载脂蛋白A1,Apolipoprotein-Al)和Apo-B(载脂蛋白B, Apolipoprotein-B)基因已被证实是重要的脂类代谢基因,在脂肪合成代谢与贮存、脂肪沉积、胆固醇运输和调节机体能量平衡等过程中发挥重要作用。本实验选取朗德鹅进行填饲处理和普通饲喂,利用cDNA末端快速扩增(RACE)和RT-PCR技术对鹅肝脏FABP克隆,得到鹅Lb-FABP基因序列;通过生物信息学软件对序列进行分析,构建系统发生树,确定蛋白质结构和性质,为进一步研究鹅肝脏FABP生物功能和表达调控打下基础。另一方面,为了探讨强饲对FABP、Apo-A1和Apo-B在肝脏中表达的影响,提取填饲后及正常朗德鹅肝脏组织的总RNA,以β-actin作为内参基因,对在肝脏中表达的FABP、Apo-B和Apo-A1这三个载脂蛋白进行荧光定量PCR,使用半定量2-△△CT法分析结果。血浆中Apo-B/Apo-A1是比Apo-B或Apo-A1单独使用评估动脉粥样硬化、Ⅱ型糖尿病和胰岛素抵抗等更优秀的生理指标。利用内参的相对定量法,数据分析得到Apo-B/Apo-A1研究结果如下:1.Lb-FABP基因克隆和生物信息学分析通过RACE进行了鹅肝脏FABP的克隆,得到了长为532bp的鹅FABP的cDNA编码区序列,序列已提交到GenBank,登录号为KF039686。并对编码的氨基酸序列生物信息学预测分析。结果表明:鹅肝脏FABP,预测有20个氨基酸的信号肽,成熟蛋白由126个氨基酸组成,主要在胞质内表达,存在多个潜在的磷酸化位点。隶属于胞质脂肪酸结合蛋白家族(即脂肪酸结合蛋白家族(FABP)).有五个亲水性区域组成,方便其折叠形成疏水内核和亲水表面,二级结构和三级结构模型表明,该蛋白由由10个p折叠组成了一个“圆桶”,而两个α螺旋则在其开口处,形成这个圆桶的盖子。其中β折叠反向平行,形成p折叠-转折-p折叠。这个结构是典型的FABP家族的通用结构。但不同于哺乳动物的L-FABP,鹅肝脏FABP与斑马鱼、非洲爪蟾、斑胸草雀、鸡、鸭和石斑鱼的Lb-FABP氨基酸高度同源,分别达到62%、69%、82%、94%、94%、88%,可确定鹅的肝脏中的FABP为Lb-FABP,由FABP10基因编码。这些信息会为以后的研究提供参考。2.鹅Lb-FABP、Apo-B/Apo-A1差异性表达分析荧光定量PCR结果表明,鹅经过填饲后,肝脏中Lb-FABP出现了下降(P>0.05)。可能因为摄取了大量高能量物质,甘油三酯的形成活跃,Lb-FABP的下降能够促进鹅减少脂肪酸的吸收,对肝脏起到了保护作用。Apo-B出现了下降(P>0.05),Apo-A1则出现上升(P>0.05)。与对照组相比,填饲组中Apo-B/Apo-A1显著下降(P<0.05),表明鹅在填饲过程中,减少胆固醇分泌进入血管中的总量,加强了胆固醇的清理,使得鹅避免了心血管方面的病变。鹅的这些基因表达显现对鹅肥肝的过度形成的抵抗。Apo-B/Apo-A1对健康的脂肪代谢具有更高的参考价值,希望能作为选种指标,以期能培育更多的健康品种,生产出健康的产品。
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