酵母菌3-磷酸甘油脱氢酶基因(gpd1)的克隆及其在高渗胁迫下mRNA转录水平的差异

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:luoxiaozhang
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环境渗透压的变化对于酵母细胞的生存有着十分重要的影响。当酵母菌处于高渗透压环境中的时候,酵母菌的生存将受到极大的威胁。在这个时候酵母菌可以通过增加胞内甘油的积累水平来减小细胞膜内外的渗透压差以实现对高渗胁迫的适应。GPD1是一个由391个氨基酸组成的蛋白质,它能催化磷酸二羟丙酮生成3-磷酸甘油,在酵母细胞适应高渗透压胁迫的过程中起着重要的作用。高渗胁迫下GPD1的表达量和它的酶活力都将会有一定程度的上升,而且gpd1基因的突变会直接导致酵母细胞无法在高渗环境中生长。 本研究选取生产中常用的酵母菌株YY、FHS和WFB,通过实验分析造成三种酵母菌株抗高渗能力差异的原因。首先分别用浓度为1%、3%、5%的NaCl对酵母菌株YY、FHS和WFB进行处理比较高渗胁迫对这三个菌株生长速度的影响。结果发现:在NaCl的浓度为1%和3%时,NaCl对FHS菌株生长速度的影响明显小于YY和WFB菌株;另外,在NaCl的浓度为1%时,NaCl对YY菌株生长速度的影响明显小于WFB菌株;当NaCl的浓度为5%时,NaCl对这三个菌株生长速度影响的强弱依次为WFB、FHS、YY,但差距并不明显。由此可以看出,FHS菌株耐高渗能力最强、YY菌株次之、WFB菌株最差。 分别克隆酵母菌株YY、FHS和WFB的gpd1基因片段并测序,分析这三个酵母菌株gpd1基因序列的差异。用生物学软件VectorNTI将YY、FHS和WFBgpd1基因序列与国际基因库(GeneBank)中的gpd1序列(X76859)进行对比,发现其同源性分别为99.32%、99.83%、99.83%。将这些DNA序列转化为氨基酸序列,再用VectorNTI比对这些氨基酸序列,结果发现受检菌株YY、FHSgpd1基因序列对应的氨基酸序列与GeneBank中gpd1序列(X76859)对应的氨基酸序列完全一致,而WFB与它们的同源性只有98.5%。 分别用浓度为1%、3%、5%的NaCl对酵母菌株YY、FHS和WFB进行处理,比较高渗胁迫对这三个菌株gpd1基因的mRNA转录水平的影响,从gpd1基因的mRNA转录水平的角度分析造成三个酵母菌株抗高渗能力差异的原因。通过RNA点杂交显示YY、FHS菌株gpd1基因的mRNA转录水平在NaCl浓度上升时候有上升的趋势;WFB菌株gpd1基因的mRNA转录水平随NaCl浓度的上升逐渐降低。实验结果显示,gpd1基因mRNA转录水平与抗高渗能力相关。
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