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背景随着人们生活水平的提高和生活方式的改变,高尿酸血症(Hyperuricemia,HUA)患病率逐年增加,我国沿海和经济发达地区HUA患病率在10%-20%。2010年-2015年期间江浙沪皖四地一项24家医院横断面研究发现江苏地区HUA检出率14.84%。此外长期接受放化疗的恶性肿瘤患者常伴随HUA,尿酸(Uric acid,UA)升高原因可能和治疗引起的肾功能不全相关。骨转移为骨外恶性肿瘤转移至骨组织,多发生在癌症的中晚期。随着治疗方法不断发展,肿瘤患者生存期明显延长,而骨转移出现的机会也显著增加。骨转移的早期发现具有重要意义,可以预防并避免不恰当治疗,提高患者的生存质量。目前用于骨转移的检查包括:放射性核素骨扫描、X线、CT,但问题在于特异性较差。而血清学检测具有操作简单、灵敏度高、监测便捷的优点,受到临床医生及科研工作者的广泛青睐。骨代谢相关的血清学标志物主要包括骨碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase,BALP)、抗酒石酸磷酸酶5b(Tartrate resistant acid phosphatase 5b,TRACP 5b)等。2014年肺癌骨转移专家共识中专门提到反应成骨代谢水平的血清标记物BALP,及其在诊断和检测骨转移进展的应用价值。但值得注意的是:在临床标本的日常检测中发现HUA患者BALP检测浓度往往被低估。相类似问题曾经出现在血清标志物TRACP 5b受高尿酸干扰的研究中。TRACP 5b是一种监测骨吸收代谢的血清标志物,在高尿酸条件下TRACP 5b检测结果会假性降低,但高尿酸影响BALP检测尚无报道,本研究试图探讨临床发现的实际问题及相关机制。方法样本收集来源于本院2014年8月到2016年2月就诊的患者血液,排除标准为癌症、肝炎、肾功能不全和炎症性疾病,比较HUA组和健康对照组BALP的检测结果。采用UA体外干扰实验:检测不同稀释度UA标准品添加条件下BALP实测浓度,观察体外UA浓度对于BALP检测结果的影响。观察高尿酸患者血液透析前后UA和BALP浓度的变化。运用细胞培养技术培养人类骨肉瘤细胞系(Saos-2)和人胚肾293细胞系(HEK293),通过胰酶消化收获,每周传代培养两次。Saos-2在不同浓度UA培养液中孵育,分别检测BALP的m RNA相对表达水平和蛋白质相对表达水平。构建BALP重组质粒:使用Olige 7.0软件设计正向和反向引物,PCR技术采用Prime STAR?HSDNA Polymerase扩增BALP片段,片段位于相对转录起始位点(Transcriptional start site,TSS)-473bp至+154bp处,经Kpn I和Bgl II消化酶切,重组到无启动子载体p GL3-Basic上,再将重组质粒测序验证阳性克隆。接着利用重组质粒瞬时转染HEK293细胞。最后,应用荧光素酶报告基因测定实验验证高尿酸对BALP启动子区域活性的影响。结果1)HUA组BALP水平比健康对照组明显降低,且和性别无关。2)体外不同UA浓度条件下,BALP的实际检测结果间差异没有统计学意义。3)高尿酸患者血透后相比较血透前:UA浓度下降,BALP浓度同时上升。4)高尿酸可抑制Saos-2细胞BALP基因m RNA水平和蛋白水平的表达。5)BALP启动子活性受到高尿酸抑制。结论HUA患者体内UA水平和BALP水平存在负相关。高尿酸抑制BALP表达,可能机制是通过抑制BALP启动子活性影响其转录和表达。