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小窝蛋白(caveolin)是分子量为21-24kDa的膜整合蛋白，是胞膜窖的包被结构成分。小窝蛋白家族含有三个成员，分别是caveolin-1、caveolin—2及caveolin—3。ceveolin-1在胆固醇平衡方面有重要作用，但是，其自身的转录调控并没有深入阐明，尤其在猪的研究中，较少报道，这成为进一步揭示其功能和利用其进行相关方面的应用的制约因素。有鉴于此，我们希望通过本论文的内容，推进猪caveolin-1基因的转录调控研究。
首先采用PCR(polymerase chain reaction)技术从猪基因组DNA中克隆到caveolin-1基因5’侧翼转录调控区，并设计多条引物，得到不同长度的DNA片段-1756～—260，将它们分别克隆到pGL3-Basic载体中。转染C2C12细胞系之后，得到活性最高的是pGLB—260。再根据生物信息学分析结果，针对caveolin-1基因5’侧翼区特定区段进行嵌套缺失和定点突变，获得了系列缺失子和突变子。然后应用DLR系统研究鉴定了小鼠成肌细胞系C2C12中调控caveolin-1基因基础表达的顺式作用元件及其转录因子。
通过生物信息学分析，我们发现在—210～—200有一个潜在HOXA1位点，-193～-184和-124～-114分别由一个潜在的Sp1位点(编号分别为Sp1.2和Sp1.3)，-141～-134有一个潜在的AP1位点。
用pGLB—213和pGLB-149做模板，将这些潜在的位点单点突变或双位点突变，以便检测关键的顺式元件。试验结果显示，用pGLB—213作为模板，突变HOXA1或Sp1.2位点后，其活性分别降低50％左右；突变AP1位点后，活性降低30％左右；突变Sp1.3后，活性降低90％左右，基本与pGL3-Basic水平相当。用pGLB-149作为模板，突变Sp1.3后，其活性降低约90％，基本与pGL3-Basic水平相当。这表明Sp1.3位点(-123～-113)是一个在CAV1的转录调控中的一个极其重要的位点。
针对caveolin-1基因核心启动子元件，设计了对应于Sp1.3的探针(-130～-105)进行EMSA(electrophoretic mobility shift assay)实验，发现这段寡核苷酸可与C2C12细胞核中的某种核蛋白结合，形成DNA-蛋白质复合物。加入抗Sp1抗体，结合带位置条带减弱，表明DNA—蛋白复合物中的蛋白是Sp1。
另外，由于生物信息学分析表明，在—70～—50和—30～—20区域内分别含有CCAATbox和TATAbox，为了验证这一预测，将这两个位点突变，发现CCAATbox突变后相对荧光素酶活性下降及其显著，几乎与pGLB的水平相当。而TATAbox突变后，相对荧光素酶活性有轻微降低。
本论文是对猪caveolin-1基因在C2C12细胞系中的表达调控机制的首次系统研究。通过本研究，找到了调控caveolin-1基因基础表达的核心启动子元件区-130～-105区段和—70～—50区段，对caveolin-1基因的后续研究有一定意义。