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KIT系由c-kit原癌基因编码的Ⅲ型酪氨酸激酶受体，广泛表达于造血祖细胞、肥大细胞、生殖细胞、黑色素细胞、Cajal间质细胞(ICCs)等。KIT受体与配体干细胞因子(Stemcellfactor，SCF)结合后，受体自身二聚化，激活其胞内酪氨酸激酶活性区，进而活化细胞内多条信号转导分子，包括在正常和肿瘤细胞分裂增殖中发挥重要作用的JAK-STAT和PI3K/AKt信号分子等，对上述细胞的存活、迁移、分裂增殖等具有重要调控作用。 我们课题组研究KIT在消化道的分布发现，胃肠黏膜上皮细胞亦表达KIT，经Westernblot和RT-PCR等方法进一步证实c-胁基因及其产物KIT蛋白存在肠黏膜组织，但其可能作用尚未见研究报道。因此，本研究利用野生型C57/BL6小鼠(Wt)，c-kit基因功能缺失性点突变杂合子小鼠(Wads/+)和纯合子小鼠（Wadsm/m），经免疫荧光染色和Westernblot检测肠黏膜上皮细胞KIT的表达;BrdU掺入研究肠黏膜上皮细胞更新，探讨KIT受体信号分子在肠黏膜上皮细胞更新中的作用;在此基础上，应用酒精灌肠和葡聚糖硫酸钠法(DSS)制作结肠黏膜损伤模型，结合BrdU掺入和HE染色等，比较野生型和杂合子小鼠结肠黏膜损伤修复差异，分析KIT信号分子在肠黏膜上皮损伤修复中的作用，为临床相关疾病的治疗提供新的实验依据。 主要结果如下: 一、KIT在小鼠肠黏膜的表达 HE染色显示野生型(Wt)、杂合子(Wadsm/+)及纯合子（Wadsm/m）小鼠肠黏膜结构和形态无明显差异。免疫荧光染色表明小肠与结肠黏膜上皮均可见KIT阳性细胞，主要分布在小肠和结肠隐窝的中下部，随肠黏膜上皮细胞分化成熟，KIT蛋白的表达逐渐减弱至消失。虽然Wadsm/+和Wadsm/m小鼠肠黏膜亦可见KIT表达，但KIT荧光染色明显减弱，甚或缺如。 二、KIT在小鼠结肠黏膜上皮细胞更新中的作用 利用BrdU掺入检测Wt、Wadsm/+和Wadsm/m小鼠结肠黏膜上皮细胞增殖，BrdU注射10min后，野生型小鼠结肠腺可见BrdU阳性细胞，而Wadsm/+与Wadsm/m小鼠结肠偶见或未见BrdU阳性细胞;BrdU注射2h和12h后，Wadsm/+和Wadsm/m小鼠结肠黏膜上皮BrdU阳性细胞数较野生型小鼠明显减少，而Wadsm/+和Wadsm/m小鼠间未见显著差异，提示c-kit基因功能缺失性突变使肠上皮更新减慢，即SCF/KIT信号分子对肠黏膜上皮的更新具有一定的调控作用。另外，BrdU注射2h后，可见BrdU阳性细胞均表达KIT，但亦有部分细胞仅为KIT阳性，Ki67免疫荧光染色可见，其阳性细胞主要分布在结肠隐窝，与KIT的分布相似，提示KIT阳性细胞为增殖活跃细胞或短暂增殖的上皮细胞。 三、KIT在结肠黏膜损伤修复中的作用 利用4％DSS和50％酒精制作结肠黏膜损伤小鼠模型，HE染色可见结肠隐窝塌陷，上皮完整性被破坏，黏膜固有层可见大量炎性细胞浸润，且杂合子小鼠肠黏膜损伤更为严重。停止DSS或酒精2天后，野生型小鼠结肠黏膜上皮基本恢复正常形态，可见形成完整的结肠隐窝;但杂合子小鼠结肠隐窝尚不完整，仍可见轻度的黏膜下水肿和少量炎症细胞浸润。结合注射BrdU(24h)，与KIT免疫荧光双标，可见野生型小鼠结肠隐窝基底部的细胞为KIT和BrdU双标阳性，亦可见少量仅表达KIT或BrdU的细胞;而杂合子小鼠双标细胞数量较野生型小鼠少，且主要集中在隐窝基底部。上述结果表明c-kit基因功能缺失性突变的杂合子小鼠上皮修复能力较野生型小鼠弱，可能与KIT表达减少，信号功能减弱有关，进而影响肠黏膜上皮损伤的修复。 结论: 1)小鼠肠黏膜上皮细胞可表达c-kit基因及其产物KIT，此细胞主要分布在肠隐窝的中下部;且Wadsm/+和Wadsm/m小鼠肠黏膜KIT表达水平较Wt小鼠明显降低。 2)KIT阳性细胞为肠黏膜上皮增殖活跃的细胞，与Wt小鼠相比，Wadsm/+和Wadsm/m小鼠肠黏膜上皮更新减慢，提示KIT参与肠黏膜上皮更新的调控。 3)Wadsm/+小鼠结肠黏膜损伤较Wt小鼠更严重，且损伤修复能力更弱，提示KIT参与肠黏膜上皮损伤的修复。