几种药物的电化学测定及其与蛋白质相互作用的研究

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药物是人类和疾病斗争、维护生命和健康的重要武器,是人类生活不可或缺的重要保障。随着人类生活质量和健康保健意识的的不断提高,药物的安全、质量成为关注的焦点。因此,寻找一种简单、便捷、准确、灵敏的药物的检测方法具有十分重要的现实意义。蛋白质是生物体内含量最丰富、功能最多的高分子物质,在几乎所有的生物过程中起着关键作用。蛋白质与药物分子之间的相互作用的研究是目前化学生物学领域的研究热点。电分析化学技术因其仪器简单、操作简便、灵敏高、检测速度快、易于微型化等优点,在药物检测、免疫分析、生物传感器领域有广泛的应用。纳米材料因其表面积大、反应活性高、吸附力强等优点,为分析化学开辟了新的研究途径。将纳米材料和高灵敏的电化学检测技术相结合,极大地提高了电化学检测的灵敏度,扩大了纳米材料应用范围。本论文的研究目的是将纳米材料与高灵敏度的电化学检测技术相结合建立几种药物的电化学分析新方法,并结合了光谱分析法对药物跟蛋白质的相互作用进行详细地研究。本论文主要从以下两部分来介绍:第一部分是综述部分,第二部分是研究报告部分。主要是利用纳米修饰电极分别建立了三种药物检测的电化学分析新方法。在建立简单、灵敏检测方法的同时,以牛血清白蛋白为蛋白研究模型,利用电分析化学、紫外光谱、红外光谱、荧光技术研究了三种药物与牛血清白蛋白的相互作用,对二者的结合常数、键合作用等进行了研究。具体主要开展了以下的研究工作:1、建立了测定卡维地洛(CAR)新的电化学方法。采用电化学方法结合紫外、红外光谱分析,研究了CAR与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。实验发现,在pH4.0Britton-Robinson(B-R)缓冲溶液中,CAR在碳糊电极上产生3个不可逆的氧化峰。以0.92V处的氧化峰为研究对象,结果发现峰电流Ipa,1与CAR浓度在2.45×10-5mol/L~1.19×10-3mol/L范围呈良好的线性关系,CAR的检出限为5.6×10-6mol/L。当BSA加入CAR溶液后,CAR峰电流降低,氧化峰电流的降低值ΔIpa,1与BSA的浓度在2.92×10-7mol/L~1.09×10-5mol/L范围内呈良好线性关系,BSA的检出限为4.1×10–8mol/L。电化学结果表明,CAR与BSA之间形成1:1的结合物,结合常数为3.14×106L/mol。紫外光谱表明CAR的加入使BSA的吸收峰发生红移且有增色效应。红外光谱表明CAR与BSA分子中氨基酸残基的硫及氮原子形成键合作用。2、建立了测定盐酸胺碘酮(Am)新的电化学分析方法。采用电化学方法结合紫外、红外光谱分析,研究了Am与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。实验发现,在pH5.0Britton-Robinson缓冲溶液中,Am在0.87V处有一灵敏的氧化峰,氧化峰电流Ipa与Am的浓度在1.8×10-7mol/L~6.7×10-5mol/L呈良好的线性关系,检出限为6×10-8mol/L(S/N=3)。当BSA加入Am溶液后,Am氧化峰电流降低,氧化峰电流的降低值ΔIpa与BSA的浓度在2.4×10-7mol/L~2.2×10-5mol/L范围内呈良好线性关系,BSA的检出限为9×10–8mol/L。电化学研究表明,Am与BSA之间形成1:1的结合物,结合常数为9.9×106L/mol。紫外光谱表明Am的加入使BSA的吸收峰发生红移且有增色效应。红外光谱表明Am与BSA分子中氨基酸残基的硫及氮原子形成键合作用。3、制备了纳米金修饰碳糊电极,采用循环伏安法和方波伏安法研究了沙丁胺醇(Sal)在修饰电极上的电化学行为。纳米金修饰碳糊电极与裸碳糊电极相比,显著提高了Sal的氧化峰电流,氧化峰电位负移50mV,提高了测定Sal的灵敏度。实验表明,氧化峰电流与Sal浓度在0.471μmol/L~64.2μmol/L范围内呈良好线性关系,检出限为0.15μmol/L(S/N=3)。对40.7μmol/L的Sal进行11次平行测定,RSD为1.7%。所建立的方法可用于血样和尿样中Sal含量的测定。当BSA加入Sal溶液后,Sal氧化峰电流降低,氧化峰电流的降低值ΔIp与BSA的浓度在2.47×10-7mol/L~2.00×10-5mol/L范围内呈良好线性关系,BSA的检出限为8.23×10–8mol/L。电化学研究表明,Sal与BSA之间形成1:1的结合物,结合常数为2.84×105L/mol。紫外光谱表明Sal的加入使BSA的吸收峰发生红移且有增色效应。红外光谱表明Sal与BSA分子中氨基酸残基的硫及氮原子形成键合作用。
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