论文部分内容阅读
骨桥蛋白(OPN)是一种含精氨酸一甘氨酸一天冬氨酸(Arg-Gly-Asp，RGD)的分泌型糖基化磷蛋白，归类于细胞外基质蛋白。OPN最先是从骨组织分离的，具有多种生物活性，可刺激钙转运和磷脂酰肌醇3一激酶的活性，调节成骨细胞及破骨细胞与骨组织的黏附，参与骨形成及重建，也参与神经发育、钙质沉积、血管重塑、平滑肌细胞增生、癌细胞浸润和转移等过程。
妊娠是一个复杂的过程，包括早期的胚胎着床及其之后的胚胎发育。胚胎着床是滋养外胚层细胞和子宫内膜细胞相互黏附和侵入的过程，涉及着床点和着床旁组织的重塑。其中，细胞因子和黏附分子在着床期子宫内膜的容受性和滋养外胚层细胞的侵入中起了重要作用。OPN既是细胞因子，又是细胞黏附分子。OPN的主要生物学功能是通过其特异性序列RGD与整合素等多种受体结合，对细胞的黏附和迁移起重要作用。近年来，有研究表明0PN在分泌期子宫内膜上皮细胞、侵袭的滋养细胞、蜕膜腺上皮、胎盘上都有表达。在子宫内膜和胚胎上，OPN主要是与αvβ3整合素受体结合，启动细胞黏附和迁移的信号转导级联反应，促进基因表达的改变。且OPN在哺乳动物的母一胚界面持续表达，人们推测OPN是影响子宫一胚胎微环境的重要因素。因此，近年来OPN在胚胎着床和发育中的作用也越来越受到人们的关注。
目的：探索0PN在妊娠小鼠的子宫和胎盘的表达规律及意义。
方法：
l、收集非孕鼠对照、孕3.5天、4.5天、5.5天、6.5天小鼠子宫内膜，及9.5天、12.5天、15.5天、l8.5天妊娠小鼠胎盘。
2、采用RT-PCR技术测定OPNmRNA的表达水平。
3、采用Westernblotting法检测OPN的表达水平。
4、利用免疫组织化学方法，定性并半定量检测OPN的表达水平。
结果：
1妊娠早期小鼠子宫内膜OPN的表达
1.1RT-PCR分析表明，OPNmRNA在对照组小鼠子宫内膜表达微弱，孕D3．5时表达增强，D4．5表达最强，D5．5表达减弱，D6．5表达减弱。
1.2Westernblotting结果与RT-PCR结果基本一致，并且表达的是45kDaOPN。
1.3IHC显示OPN在对照组小鼠子宫的腔上皮、腺上皮、基质细胞上表达较弱，孕D3.5OPN在子宫内膜腔上皮细胞、腺上皮细胞的表达增强，孕D4.5子宫内膜腔上皮细胞、腺上皮细胞表达最强，孕D5.5子宫内膜腔上皮细胞和腺上皮细胞表达减弱；孕D6.5子宫内膜腺上皮细胞、腔上皮细胞表达数量少且强度弱。
2妊娠中后期小鼠胎盘OPN的表达
2.1RT-PCR分析发现妊娠D9.5时可以在胎盘检测到OPNmRNA，D12.5时表达增强，一直持续到D15.5，并在D18.5天出现表达高峰。
2.2Westernblotting分析结果与RT-PCR结果基本一致，且在胎盘上有45kDa和70kDa的OPN表达，45kDa较70kDa表达要强。
23IHC分析发现，OPN在孕D9.5的蜕膜上表达较强，D12.5表达最强，D15.5和D18.5时表达都很弱。OPN在滋养层巨细胞的表达是孕D9.5表达较强，D12.5最强，D15.5和D18.5都较弱。OPN在海绵状滋养层和胎盘血窦上的表达是逐渐增强的，孕D18.5时表达最强。
结论
1.OPN基因及蛋白在早孕小鼠子宫内膜的动态表达规律及其在子宫内膜的分布变化提示OPN参与了胚泡着床最初的黏附过程，通过影响子宫腔上皮与外部环境的交流，使子宫内膜容受性达到最佳状态，从而影响滋养层细胞与子宫内膜的相互作用以利于胚泡的着床。
2.OPN在妊娠中后期小鼠胎盘的表达和分布提示，OPN可能是影响子宫-胚胎微环境的重要组成部分，参与了胎盘形成，促进了胚胎发育成熟。
总之，OPN在小鼠妊娠过程中可能的作用如下：(1)在整个孕期，是影响子宫-胚胎界面细胞黏附和信号转导的组织营养物质的成分；(2)是子宫内膜和滋养层细胞表达的产物，引起与胚胎侵袭相关的蜕膜化改变；(3)是长期在子宫和胚胎免疫细胞表达并能调节与其相关功能的细胞因子，促进胚胎正常发育，成功维持妊娠。