【摘 要】
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目的：构建加强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,pEGFP)联合γ干扰素(mouse interfero-γ gene,mINF-γ)重组真核表达质粒pEGFP-mINF-γ,并转染入卵巢癌细胞(
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目的：构建加强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,pEGFP)联合γ干扰素(mouse interfero-γ gene,mINF-γ)重组真核表达质粒pEGFP-mINF-γ,并转染入卵巢癌细胞(the proliferation of human ovarioncarcninoma cell line)SKOV3中,研究其转染后对卵巢癌细胞系skov3的抑制作用及其相关性。
方法：将pEGFP与人INF-γ基因体外重组质粒,转染入卵巢癌细胞株SKOV3,用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)法鉴定目的基因mRNA的表达及用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)方法测定重组质粒转染组细胞上清液的INF-γ的分泌量,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和细胞染色法检测INF-γ对SKOV3细胞体外生长和凋亡等生物学行为的影响。
结果：(1)重组质粒经基因测序及显微镜下观察证实已经构建成功。(2)RT-PCR证实此重组质粒已整合到SKOV3细胞并获稳定表达。(3)MTT法检测三组细胞的增值速度,并计算细胞抑制率,差异有统计学意义,重组质粒转染组明显高于空白对照组。(4)细胞上清液中有INF-γ的分泌,其分泌量重组质粒转染组明显高于绿色荧光转染组和空白对照组(p＜0.05)。(5)Hochest细胞凋亡染色检测显示SKOV3-mINF-γ组凋亡率明显高绿色蛋白转染组和空白对照组(p＜0.05),差异有统计学意义(p＜0.05),绿色蛋白转染组和空白对照组,组间差异无统计学意义(p＞0.05)。
结论：(1)成功构建了真核表达质粒pEGFP-mINF-γ,该质粒转染人卵巢癌细胞SKOV3可抑制其生长(2)同时细胞上清液中有INF-γ的分泌,且转染后并不影响INF-γ的分泌量,(3)异种INF-γ基因可能对人上皮性卵巢癌起重要作用,促进细胞凋亡。
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