【摘 要】
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肌肉生长抑制素(Myostatin，MSTN)是转化生长因子β超家族的一员，是骨骼肌生长、分化的负调控因子，主要作用是抑制成肌细胞的增生与分化。深入研究MSTN基因在鱼类肌肉生长发育过
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肌肉生长抑制素(Myostatin，MSTN)是转化生长因子β超家族的一员，是骨骼肌生长、分化的负调控因子，主要作用是抑制成肌细胞的增生与分化。深入研究MSTN基因在鱼类肌肉生长发育过程中的作用机制，探索该基因在大口黑鲈养殖生产中的潜在应用价值，不但是鱼类肌肉生长分子调控机理中的重要内容，也将为鱼类的肉质品质改良研究提供理论依据。为了了解MSTN对大口黑鲈仔鱼生长的影响，本实验将大口黑鲈(Micropterus salmoides)MSTN成熟肽cDNA改造后克隆到pET32a(+)载体上，构建原核表达质粒，在大肠杆菌BL21中进行表达。SDS-PAGE检测表明表达的重组蛋白分子大小约28 kDa，含量为菌体总蛋白的34％。用纯化后的蛋白免疫新西兰兔，制备抗大口黑鲈MSTN的多克隆抗体，Western blot和ELISA检测证实所获得的抗体可与抗原蛋白特异性结合，抗体的效价为1:62500。将获得的抗体显微注射到大口黑鲈受精卵的卵黄区，以观察MSTN失活后对鱼对生长造成的影响，结果显示实验组的仔鱼生长比对照组加快。此外，进行了肌肉中过量表达MSTN的研究。将大口黑鲈MSTN前肽基因定向克隆到pcDNA3.1(-)/mycHisB质粒，构建真核重组表达载体pcDNA3.1(-)/myc HisB-proMSTN。经肌肉注射法将重组表达载体注入大口黑鲈背部肌肉，RT-PCR和免疫组化学确认MSTN前肽基因已在肌肉组织中局部转录和表达。本研究探讨了在鱼类肌肉中过量表达MSTN抗体和MSTN前肽对鱼类肌肉的促生长作用，为今后研究MSTN基因的作用机制及开发应用其奠定基础。
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