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根据Goldkey等软件分析结果,选择NS3含有多种优势抗原表位的225-616氨基酸的基因序列部分设计合成RT-PCR引物.通过C6/36细胞培养D2-43株病毒,提取基因组RNA,采用双退火温度进行反转录PCR反应,扩增了NS3基因片段.将其插入到T载体中,采用菌落PCR快速鉴定重组子,用限制性梅切分析插入片段的大小.并经DNA序列分析证明克隆的NS3基因与文献报道一致.