癫痫儿童外周血淋巴细胞CD19、CD20、CD4、CD8表达的研究

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目的:   癫痫(Epilepsy,EP)是多种原因引起大脑神经元反复发作性异常放电引起的相应的突发性和一过性脑功能障碍,是小儿中枢神经系统(Central Nervous System,CNS)常见疾病之一。发病机制复杂,目前尚未阐明。经规范抗癫痫药物治疗仍有20%-30%患儿发作未能控制。   国内外研究证明癫痫与免疫有密切的关系,但机制未明。已有研究表明细胞因子IL-2,IL-6,TNF-a参与癫痫的发病,但对直接影响体液免疫和细胞免疫功能的B、T淋巴细胞亚群与癫痫发生、发展的关系的研究鲜有报道。   自1977年Pechadre等人首次提出免疫球蛋白可有抑制癫痫作用以来,陆续有学者临床上应用静脉注射用人免疫球蛋白(Human Intravenous Immunoglobulin,IVIG)治疗癫痫,结果发现IVIG对癫痫治疗有效,但其治疗癫痫的机制目前仍不清楚。   本课题旨在通过测定癫痫儿童外周血淋巴细胞亚群CD19、CD20、CD4、CD8的百分率及CD4/CD8比值,探讨外周血T、B淋巴细胞亚群与癫痫发作的关系,寻找IVIG治疗癫痫尤其是难治性癫痫的机制,为临床应用免疫调节剂治疗癫痫提供依据。   方法:   1、收集在本院儿童神经专科住院的癫痫患儿80例,符合2005年国际抗癫痫联盟(ILAE)关于癫痫的定义。年龄4个月~14岁,男51例,女29例。其中全身强直-阵挛性发作42例,失神发作11例,单纯和复杂部分性发作19例,婴儿痉挛征7例,Landau-Kleffner综合征1例。病史6天~2.5年。发作频率:半年内发作次数多于5次76例,少于或等于5次4例。   2、将病例分为四组:A组(治疗对照组,n=29),B组(AEDs组,n=51),C组(AEDs+IVIG组,n=49),D组(IVIG组,n=12),E组(正常对照组,n=30)。IVIG用量2g/kg,分3~5天静脉滴注,均在用药3~4周后复查淋巴细胞亚群。   3、正常对照组(E组):为健康体检儿童,男17例,女13例,年龄2岁~14岁,平均年龄6.50±2.08岁,本人及家族中均无过敏性疾病史。各组性别、年龄比无显著性差异。   4、入组标准:所有癫痫患儿抽血前一个月均无感染证据,无疫苗接种,未使用免疫增强或抑制药物。非过敏性哮喘、过敏性鼻炎等过敏体质者,非合并类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、过敏性紫癜等其他免疫性疾病者。   5、影像学及脑电图资料:脑电图异常56例,正常13例;头颅MR异常27例,正常30例。   6、标本收集及检测:收集各组儿童晨起空腹静脉血2ml,于2小时内用流式细胞仪进行外周血CD19、CD20、CD4、CD8淋巴细胞百分率及CD4/CD8比值的测定。   结果:   1、临床疗效判断标准:参照1980年全国癫痫会议制定的标准:发作完全停止为控制;发作频率减少75%以上为显效;发作频率减少51%~75%为有效;减少26%~50%为效差;减少<25%或次数不减少或加重为无效[2]。本研究中癫痫儿童用AEDs+IVIG联合治疗有效率87.5%,单用AEDs治疗有效率52.9%,两者比较P<0.05,有统计学差异。IVIG治疗组有效率83.3%,与AEDs组比较P=0.05,差异无统计学意义;IVIG治疗组与AEDs+IVIG联合治疗组比较P>0.05,差异无统计学意义。   2、B淋巴细胞亚群:治疗对照组外周血淋巴细胞CD19、CD20表达较正常对照组儿童明显升高,各病例组CD19、CD20表达均较正常对照组高。IVIG治疗组及AEDs+IVIG联合治疗组均可使CD19、CD20表达下降,但均未能降至正常水平。IVIG组与AEDs+IVIG组CD19、CD20表达无显著差异(P>0.05)。AEDs组CD19、CD20表达与治疗对照组比较无差异(P>0.05)。   3、T淋巴细胞亚群:治疗对照组CD4表达、CD4/CD8比值较正常对照组表达下降,差异有统计学意义;IVIG治疗组及AEDs+IVIG联合治疗组均可使CD4表达上升,CD4/CD8比值升高,与治疗对照组比较有统计学差异。IVIG组与AEDs+IVIG组比较CD4表达,CD4/CD8比值无差异;治疗对照组与AEDs治疗组比较CD4表达,CD4/CD8比值无差异。   4、脑电图正常与异常组比较CD19、CD20、CD4、CD8的百分率及CD4/CD8比值均无统计学差异。   5、头颅MR正常与异常组比较CD19、CD20、CD4、CD8的百分率及CD4/CD8比值均无统计学差异。   6、癫痫治疗效果与CD19、CD20治疗前后的差值(降幅)呈正相关,与CD4、CD8治疗前后的差值无相关。   结论:   1、癫痫患儿CD19、CD20表达升高,存在B细胞功能紊乱,下调CD19、CD20表达可使临床发作减轻。癫痫治疗效果与CD19、CD20治疗前后的差值(降幅)呈正相关。   2、癫痫儿童CD4T细胞功能紊乱,CD4表达下降,至CD4/CD8比值降低,CD8表达与正常对照组无显著差异(P>0.05)。   3、单用IVIG组与抗癫痫药物+IVIG组均可通过下调CD19、CD20表达,上调CD4表达。提示IVIG可以有效调节T、B淋巴细胞功能,通过改变CD4+T细胞功能亚群的分布抑制了B细胞的过度活化,减轻细胞免疫和体液免疫反应对神经的损伤,控制癫痫发作。   4、头颅MR及脑电图表现与外周血淋巴细胞亚群无显著相关性。
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