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目的：通过临床免疫组化检测Ⅲ期结肠癌患者肿瘤组织中p21WAF1CIP1、p53、MDM2及ub蛋白的表达情况，随访观察p21WAF1CIP与术后辅助化疗生存及预后的关系。进一步采用体外人结肠癌细胞系(HCT-116)培养实验，检测各化疗药物（5-FU、L-OHP、CPT-11、CDDP）对HCT-116的增殖抑制作用及药物敏感性，分析HCT-116细胞中p21WAF1CIP1信号通路中p21WAF1CIP1、p53及MDM2蛋白表达的相关性，初步探讨p21WAF1CIP信号通路调控结肠癌化疗药物敏感性的作用机制。方法：本研究分两部分，第一部分为临床免疫组化：收集我院2007.1.1-2010.12.31期间术后病理为Ⅲ期结肠癌患者，从中随机抽取20例，随访至2014.5.1，评估DFS。纳入标准：术后病理标本根据2013年NCCN指南明确诊断Ⅲ期结肠癌患者；术后行辅助化疗患者；KPS评分≥80分，或ZPS评分≤3分。排除标准：术前行化疗患者；合并严重全身疾病或其他原发性肿瘤患者；妊娠期妇女。再采用双盲法将所收集的病理标本免疫组化检测肿瘤组织p21WAF1CIP1、p53、MDM2、ub的表达，随访研究对象至2014年5年1日，评估DFS。第二部分为：体外人结肠癌细胞HCT-116实验：Western blot方法检测p21WAF1CIP1、p53、MDM2在结肠癌细胞中表达；MTT方法检测化疗药物(5-FU、DDP、L-OHP、CPT-11）对结肠癌细胞增殖抑制的影响及药物敏感性分析；Annexin V-FITC/PI（流式细胞技术）检测各化疗药对结肠癌细胞凋亡率的影响。结果：1、临床病理免疫组化研究：Ⅲ期结肠癌患者癌组织p21WAF1/CIP1与p53表达具有明显正相关，其相关系数r=0.995，p=0.00,有统计学意义；且与病理类型有关，管状腺癌较其他类型高表达，有统计学差异（p=0.012）；p21WAF1/CIP1阳性表达较阴性表达DFS：p=0.032,风险比HR=1.592，有统计学意义，p21WAF1/CIP1有延长患者术后化疗无病生存期的趋势。2、人结肠癌细胞HCT-116对5-Fu、L-OHP、CPT-11和CDDP化疗药物敏性验：MTT法检测5-Fu、L-OHP、CPT-11和CDDP化疗药物对HCT-116增殖抑制：各化疗药物对人结肠癌细胞HCT-116的IC50浓度比较： L-OHP组与CPT-11组相比教、CPT-11组与5-Fu组比较、5-Fu组与CDDP组相比较、CDDP组与L-OHP组相比较，结果均无显著性差异（P＞0.05）。FCM双荧光法检测5-Fu、L-OHP、CPT-11和CDDP化疗药物对HCT-116细胞凋亡：CDDP组的总凋亡率为7.5％，早期凋亡率为1.40％；L-OHP组的HCT-116细胞总凋亡率为32.5％，早期凋亡率为11.21％；CPT-11组的HCT-116细胞总凋亡率为47.4％，早期凋亡率为24.6％；5-Fu组的HCT-116细胞总凋亡率为27.9％，早期凋亡率为5.71％。3、L-OHP、CPT-11、5-Fu、和CDDP化疗药物对HCT-116细胞中p21、p53（DO-1）、MDM2蛋白表达的影响（免疫印迹法）western blot:上调p21WAF1/CIP1蛋白的表达，减弱MDM2蛋白的表达，对p53蛋白的作用是先（48h）增强p53蛋白表达，后(72h)逐渐减弱该蛋白表达。结论：1、临床病理免疫组化研究：Ⅲ期结肠癌患者癌组织p21WAF1/CIP1蛋白与p53蛋白表达具有明显正相关，且与病理类型有关，管状腺癌较其他类型高表达，p21WAF1/CIP1蛋白阳性表达有延长患者术后化疗无病生存期的趋势。2、人结肠癌细胞HCT-116对5-Fu、L-OHP、CPT-11和CDDP化疗药物敏性实验:各药物均能明显抑制体外培养HCT-116细胞增殖，具有明显的细胞毒性,但各化疗药物之间无明显统计学差异。3、5-Fu、L-OHP、CPT-11和CDDP化疗药物对人结肠癌细胞HCT-116的作用机制：上调p21WAF1/CIP1蛋白的表达，减弱MDM2蛋白的表达，对p53蛋白的作用是先增强p53蛋白表达，后逐渐减弱该蛋白表达。综之：结肠癌细胞对化疗药物的敏感性可能与p21WAF1/CIP1信号通路活化有关，即化疗药物通过上调p21WAF1/CIP1及p53蛋白表达，抑制MDM2蛋白表达，从而诱导肿瘤细胞凋亡，并且有延长Ⅲ期结肠癌患者术后化疗无病生存期趋势。