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[目的]探究结直肠癌肿瘤微环境中细胞因子TGF-β1介导肿瘤免疫逃逸的分子机制。[方法]首先,采用免疫组化法、microRNA(miRNA)芯片、实时荧光定量PCR法(qPCR)、流式细胞术和ELISA等方法分别测定结直肠癌组织和细胞中TGF-β1、microRNA、B7-H3和B7-H4等分子的表达水平及其表达相关性。然后,采用蛋白免疫印迹法(WB)和 qPCR 等方法分别研究 TGF-β1、SMAD3、SMAD4、CEBPB、B7-H3、B7-H4、miR-155、miR-143之间的表达调节作用。再采用功能抑制实验对SMAD3和SMAD4调控miR-155表达、CEBPB调控miR-143表达的作用进行研究;并采用WB、实时荧光定量PCR和双荧光素酶报告基因系统研究了 miR-155对CEBPB、miR-143对B7-H3和B7-H4的表达抑制作用。之后,采用流式细胞术和ELISA等方法研究了肿瘤细胞上表达B7-H3和B7-H4对T细胞分泌免疫抑制性细胞因子的影响。最后,通过体内外实验对miR-143抑制肿瘤细胞中B7-H3和B7-H4表达,以及抑制肿瘤生长的功能活性进行了研究。[结果](1)结直肠癌中TGF-β1与负性协同刺激分子B7-H3和B7-H4均呈现异常高表达,并存在正相关。(2)在肠癌细胞中加入重组TGF-β1后细胞膜和细胞质中B7-H3和B7-H4的表达均升高;同时,SMAD3、SMAD4、miR-155表达升高,而CEBPB和miR-143表达降低。(3)抑制SMAD3和SMAD4表达后miR-155的表达降低;而抑制肠癌细胞中CEBPB表达后,miR-143的表达也随之降低。(4)WB和qPCR等方法结合功能实验结果证实,miR-155可以显著抑制肠癌细胞中CEBPB的表达,miR-143可以显著抑制B7-H3和B7-H4表达。(5)在肠癌细胞中上调B7-H3和B7-H4表达可以促进T细胞分泌TGF-β1、IL-2、IL-6和IL-17等免疫抑制性细胞因子,从而发挥免疫抑制作用。(6)体内外实验均证实,上调肠癌细胞中miR-143可以显著降低B7-H3和B7-H4表达,从而有效抑制肿瘤生长。[结论]TGF-β1通过miR-155/miR-143转录后上调B7-H3和B7-H4的表达,从而介导肿瘤免疫逃逸,维持了肿瘤微环境的稳态,为肿瘤免疫治疗提供了新的理论依据。小结本研究发现TGF-β1可以通过miR-155和miR-143上调负性协同刺激分子B7-H3和B7-H4,同时B7-H3和B7-H4可以反馈性诱导T细胞分泌免疫抑制细胞因子TGF-β1来维持肿瘤微环境。体内外实验证实miR-143可以抑制B7-H3和B7-H4表达,从而有效抑制肿瘤的生长。研究结果揭示了肿瘤细胞与T细胞之间相互作用的新机制,并且证明了 TGF-β1可以上调负性协同刺激分子的表达,在癌症免疫逃逸中发挥了重要作用。