【摘 要】
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重症急性呼吸综合症(Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS)的病原是SARS冠状病毒(SARS.CoV)，为了调查野生动物和家畜家禽体内携带的冠状病毒的情况以及其与SARS.CoV的基因
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重症急性呼吸综合症(Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS)的病原是SARS冠状病毒(SARS.CoV)，为了调查野生动物和家畜家禽体内携带的冠状病毒的情况以及其与SARS.CoV的基因序列同源性，本研究根据SPA能与多种动物血清IgG结合的特性，建立了间接PPA-ELISA检测多种动物血清中SARS病毒相关抗体的方法；根据SARS冠状病毒聚合酶基因序列设计引物，建立套式PCR(nest-PCR)检测方法。对11种动物146个样品进行RT-PCR检测，并用PCR产物测序。与Genbank中的SARS相关冠状病毒的聚合酶基因进行序列比较，构建系统发育树，分析不同宿主来源动物冠状病毒与SARS冠状病毒的同源性。两种检测方法的实验结果表明： SPA与多种哺乳动物血清中的IgG有较好的结合能力，本实验确定了PPA-ELISA的抗原-抗体最佳反应时间，HRP-SPA与抗体反应最佳时间及底物溶液的显色时间，在此基础上，建立了间接PPA-ELISA检测多种动物血清中SARS病毒相关抗体的检测程序。 通过对冠状病毒聚合酶基因的扩增和序列分析，结果表明被检测的动物样品中的冠状病毒聚合酶的保守基因序列与SARS冠状病毒聚合酶的同一位置的基因序列同源性为100％～95.8％。 通过对同一动物的PPA-ELISA和nest-PCR检测表明，两种检测的约为符合率60％～70％，两种方法的同时使用对动物冠状病毒的检测有着重要的参考价值。
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