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目的：检测正常子宫内膜组织和内膜癌组织中HOTAIR的表达，并分析其与临床病理特征之间的关系。深入探索HOTAIR对子宫内膜癌细胞增殖，侵袭及体内成瘤及转移能力的影响。并探讨HOTAIR调控子宫内膜癌细胞增殖及侵袭机制。 方法：利用qRT-PCR技术和原位杂交方法检测了临床组织中HOTAIR的表达情况，并对HOTAIR表达与患者临床病理特征之间的相关性进行了分析。利用数据挖掘，对TCGA数据库中的相关数据进行生物信息学分析。利用AN3CA，KLE，SPEC-2，HEC-1B，RL-95，Ishikawa等细胞株经过一系列体内体外实验来检测HOTAIR对细胞株的增殖、侵袭的影响。利用450K人甲基化芯片检测HOTAIR对下游基因甲基化的影响。HOXA10被锁定为HOTAIR其下游靶向基因。并进一步在临床标本和细胞株实验中验证了两者的关系。 结果：与正常内膜组织相比，内膜癌组织HOTAIR表达显著上调（P<0.001）。且HOTAIR表达水平与临床分期（P<0.05）和淋巴结转移（P<0.05）呈正相关。生物信息学分析发现高表达HOTAIR的内膜癌患者较低HOTAIR表达患者，生存期显著下降（P<0.05）。体外实验发现过表达HOTAIR能够促进内膜癌细胞株的增殖及侵袭能力。相反，沉默HOTAIR则抑制了内膜癌细胞株的增殖与侵袭能力。体内实验发现过表达HOTAIR促进了内膜癌细胞的侵袭和转移。HOXA10在过表达HOTAIR的细胞株中甲基化明显。而恢复HOXA10的表达能够逆转过表达HOTAIR造成的细胞生物学行为的改变。 结论：HOTAIR在子宫内膜癌中显著高表达；HOTAIR高表达与内膜癌预后正相关。HOTAIR能够促进子宫内膜癌细胞的增殖和侵袭能力。HOTAIR通过靶向HOXA10调控子宫内膜癌的细胞生物学行为。 第一部分 HOTAIR在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义 目的：检测正常子宫内膜组织和内膜癌组织中HOTAIR的表达，并分析其与临床病理特征之间的关系。 方法：利用qRT-PCR技术检测了66例内膜癌冰冻组织和30例正常内膜冰冻组织中HOTAIR的表达；利用原位杂交技术对129例福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片（其中包括96例冰冻组织，21例其他内膜癌组织和12例不典型增生组织）进行HOTAIR表达检测及评分。并对HOTAIR表达与患者临床病理特征之间的相关性进行了分析。利用数据挖掘，对TCGA数据库中的相关数据进行生物信息学分析。 结果：与正常内膜组织相比，内膜癌组织HOTAIR表达显著上调（P<0.001）。且HOTAIR表达水平与临床分期（P<0.05）和淋巴结转移（P<0.05）呈正相关。FFPE组织的原位杂交结果显示，HOTAIR表达上调也与肌层浸润深度（P=0.019）以及淋巴血管间隙浸润（P=0.015）相联系。更重要的是，生物信息学分析发现高表达HOTAIR的内膜癌患者较低HOTAIR表达患者，生存期显著下降（P<0.05）。 结论：HOTAIR在子宫内膜癌中显著高表达； HOTAIR高表达与内膜癌预后正相关，提示HOTAIR可能促进子宫内膜癌的恶性进展。 第二部分 HOTAIR促进子宫内膜癌细胞增殖及侵袭功能 目的：检测不同子宫内膜癌细胞株中HOTAIR的表达，探索HOTAIR对子宫内膜癌细胞增殖，侵袭及体内成瘤及转移能力的影响。 方法：Realtime PCR检测AN3CA，KLE，SPEC-2，HEC-1B，RL-95，Ishikawa五株子宫内膜癌细胞株中HOTAIR的表达。通过构建过表达质粒和发夹状RNA（shRNA），对高表达HOTAIR的AN3CA进行下调HOTAIR，而低表达的Ishikawa上调HOTAIR的表达。并在体外进行 CCK8，平板克隆，Transwell小室，划痕实验等功能实验研究HOTAIR改变内膜癌细胞株增殖及侵袭能力。包装逆转录病毒，构建HOTAIR过表达稳转株IshikawaHOTAIR细胞株并进行体内实验，包括裸鼠荷瘤实验，腹腔转移实验及尾静脉远处转移实验等检测HOTAIR体内改变内膜癌细胞株的增殖及侵袭能力。 结果：在未分化转移癌AN3CA细胞中表达最高，而在低分化的Ishikawa细胞中表达最低。体外实验发现AN3CA下调HOTAIR后增殖、迁移和侵袭能力得到明显抑制；而过表达HOTAIR的Ishikawa细胞的增殖、迁移和侵袭能力则显著增强。体内实验发现过表达HOTAIR的Ishikawa细胞增殖及侵袭能力显著增强。 结论：HOTAIR能够促进子宫内膜癌细胞的增殖和侵袭能力。 第三部分 HOTAIR通过靶向HOXA10从而影响子宫内膜癌细胞的生物学行为 目的：探讨HOTAIR调控子宫内膜癌细胞增殖及侵袭机制，探索HOTAIR通过靶向HOXA10甲基化来调控内膜癌进展的可能。 方法：构建HOTAIR过表达稳转株IshikawaHOTAIR和Ishikawacontrol，利用450K人甲基化芯片进行两组细胞株之间的基因甲基化差异筛查。对差异甲基化改变的基因进行聚类分析，筛选出不同HOTAIR表达情况下甲基化差异表达的基因。我们把目标基因锁定为甲基化明显的HOXA10基因。并用westernblot，qRT-PCR等方法对芯片结果进行验证。并通过过表达HOXA10进行拯救实验验证。最后在正常子宫内膜（20例）和子宫内膜癌组织（40例）进行免疫组织化学检测HOXA10和原位杂交检测HOTAIR，并进行染色评分，验证两者表达相关性。 结果：甲基化芯片发现过表达HOTAIR的稳转株较对照组的细胞株，有24566条基因甲基化差异明显，其中高甲基化改变的达18136条。HOXA10CpG岛处高甲基化明显。高表达HOTAIR的稳转株细胞中HOXA10的mRNA和蛋白表达均下降。再构建HOXA10的高表达质粒，通过拯救实验发现，HOXA10能够逆转HOTAIR诱导的细胞生物学行为的改变。与正常内膜组织相比，HOXA10在内膜癌组织中表达显著下降，而且其与HOTAIR表达明显负相关（P=0.0373）。 结论：HOTAIR通过靶向HOXA10调控子宫内膜癌的细胞生物学行为。