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从 2002 年 8 月至 2003 年 9 月,从云南省主要烟草种植区采集新鲜烟草植株用于分离内生真菌。用组织分离与表面消毒有效性评价相结合的方法确定了烟草内生真菌的有效分离方法及相关技术参数。次氯酸钠消毒是关键步骤,应根据不同生长期的不同烟草组织选择适宜的消毒时间,在保证表面消毒效果的前提下获得尽可能多的菌株。 获得的 186 个菌株在通常条件下多不产孢,经过多种方法的诱导产孢,主要是近紫外线照射和培养基中添加烟草组织,共有 70 个菌株在人工培养条件下产孢,鉴定为 10 个种,分别是:烟草黑痣菌(Phyllachoranicotiae W. Han sp. nov.),烟生黑痣菌(Phyllachora nicoticola W. Han sp.nov.),尖小丛壳菌(Glomerella acutata J. C. Guerber & J. C. Correll),烟草拟盘多毛孢(Pestalotiopsis nicotiae W. Han sp.nov.),附球茎点霉(Phomaepicoccina Punithalingam, Tulloch & Leach),楸子茎点霉(Phoma pomorumTh?m),小孢串珠镰孢霉(Fusarium moniliforme Sheld. var. minus Wollenw.& Reinking),球黑孢(Nigrospora sphaerica (Sacc.) Mason),芸苔生链格孢(Alternaria brassicicola (Schw.) Wiltshire),柑橘链格孢(Alternaria citriEllis et Pierce)。其中有 3 个新种:烟草黑痣菌,烟生黑痣菌和烟草拟盘多毛孢;3 个中国新纪录种:尖小丛壳菌,附球茎点霉和楸子茎点霉。 柑橘链格孢数量最多,占菌株总数的 24%,存在于烟草的整个生长季,是地理遍在种;烟草黑痣菌和烟生黑痣菌只存在于叶中,附球茎点霉和楸子茎点霉只存在于茎中,具有组织专化性;烟草内生真菌年内种群变动呈递增趋势,至成熟期数量、种类最多;尚缺乏有力的证据证明是否存在品种水平上的宿主专化性。