论文部分内容阅读
目的研究鞘氨醇激酶1(SphK1)和黏着斑激酶(FAK)在结肠癌中的表达及其与临床病理特征的关系,并探讨其在结肠癌发生发展中的作用及其可能的分子机制。方法①采用免疫组织化学SP法检测66例结肠癌、对应癌旁及正常结肠黏膜组织中SphK1和FAK的表达；用统计学方法分析二者表达与临床病理特征的关系。②体外培养人结肠癌细胞株lovo,用终浓度为100nmol/L的佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯(PMA)以及终浓度为50μmol/L的N,N-二甲基鞘胺醇(DMS)分别作用于人结肠癌lovo细胞,一定时间后,采用MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Tranwell小室模型观察细胞迁移和侵袭能力的变化,RT-PCR检测FAKmRNA的表达,Western blot检测FAK蛋白的表达。结果①组织免疫组化结果显示：Sphk1和FAK蛋白在结肠癌及其癌旁、正常组织中的表达阳性率分别为：72.7%(48/66)、51.5.%(34/66)、34.8%(23/66)；77.3%(51/66)、37.9%(25/66)、22.7%(15/66),Sphk1和FAK在结肠癌与癌旁及正常结肠黏膜组织的阳性率差异均有统计学意义(P值<0.05)。SphK1和FAK表达之间存在明显关联性(r=0.480,P=0.000)。SphK1和FAK在癌组织中的表达水平均与肿瘤浸润程度、组织分化程度、有无远处转移、淋巴结转移、临床分期有关(P值均<0.05)。②体外实验结果显示：PMA显著促进细胞的增殖、迁移和侵袭能力,DMS则显著抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力(对照组、PMA组和DMS组的细胞增殖活力分别为：0.71±0.03vs1.05±0.05vs0.46±0.04；克隆形成率分别为：1.32%±0.26%vs2.17%±0.17%vs0.73%±0.13%；迁移细胞数分别为：72.19±3.36vs98.46±6.25vs40.48±4.27；侵袭细胞数分别为：75.48±4.12vs143.36±5.73vs38.57±3.24；P值均<0.05vs对照组)。PMA显著促进黏着斑激酶(FAK)的活性和表达,相反DMS则抑制FAK的活性和表达(对照组、PMA组和DMS组FAK mRNA的表达强度：0.151±0.008vs0.212±0.014vs0.114±0.021；蛋白：0.332±0.022vs0.374±0.029vs0.296±0.018；磷酸化FAK(p-FAK Tyr397)蛋白：0.186±0.032vs0.234±0.017vs0.112±0.023；P值均<0.05vs对照组)。结论1.SphKl和FAK可能与结肠癌的发生、发展密切相关,并可能在结肠癌的浸润和转移中起重要作用。2. SphK1可促进lovo细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其机制可能是通过激活FAK通路而发挥作用。