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过氧亚硝酸根离子(ONOO-)具有很强的硝化和氧化能力,可以在生理或病理条件下,对蛋白质进行翻译后修饰过程。这种修饰可造成蛋白质的硝化进而导致变性,产生一系列的细胞毒性作用,并最终可能引发疾病。纤维蛋白原是人体血浆中的重要蛋白质,是血浆蛋白中易被氧化、硝化攻击的蛋白质。其主要生理功能是参与凝血的最后一步,在凝血酶的作用下释放出纤维蛋白单体,并共价交联为稳定的可溶性蛋白纤维。它是冠心病发病的危险因素之一,有研究表纤维蛋白原可导致体内的血黏度升高,血小板聚集性增强,冠状动脉血栓发生率增加,促进冠状动脉粥样硬化的进展。
本论文以纤维蛋白原为对象,探讨了ONOO-对纤维蛋白原性状的改变以及由此引发生物活性改变的关系。利用紫外分光光度法以硝化产物生成量作为指标,研究几种常见离子(MoCl2、CuSO4、COCl2、MnCl2、Na2SeO3、Vc、Ve)对过亚硝酸根硝化损伤纤维蛋白原的影响；并进一步利用紫外检测和三维荧光法研究Mn(Ⅱ)、Co(Ⅱ)的浓度与其促进硝化损伤作用之间的关系和对硝化损伤后生物活性的影响；并在此基础上研究维生素C对Mn(Ⅱ)、Co(Ⅱ)促进硝化的抑制作用和对硝化后生物活性的影响。
实验结果证明了Mn(Ⅱ)和Co(Ⅱ)对纤维蛋白原的硝化损伤有促进作用,离子体系浓度与硝化损伤程度成正向关系。维生素C对纤维蛋白原的硝化损伤有抑制作用,离子体系浓度与硝化损伤程度成反向关系。在生理条件下当凝血酶作用时,纤维蛋白原的生物活性随着作用时间的增加而逐渐降低直至消失。主要表现随着添加Mn(Ⅱ)和C0(Ⅱ)的浓度逐渐升高,凝聚活性也随之下降,最后利用SDS-电泳比对纤维蛋白原硝化后的肽链片段进行了比对后发现,在硝化反应过程中纤维蛋白原的三条肽链是按照γ,Bβ,Aα的顺序先后依次进行硝化损伤的。
本论文就过氧亚硝酸根对纤维蛋白原中氨基酸硝化作用及其机理进行研究。对于了解相关疾病的发病因素并进行预防或治疗有着重要意义。