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目的:
肿瘤患者住院期间由于感染、化疗等因素促进了血栓发生风险，导致患者死亡率明显增加。炎性小体(Inflammasomes)是由细胞内模式识别受体参与组装形成的多蛋白复合体，在经过多种类型的病原体或危险信号激活后，能活化caspase-1，从而引起细胞焦亡(pyroptosis)，促进炎性细胞因子的分泌，该过程在体内免疫反应监视和清除病原体中起着非常重要的作用。本研究拟探讨炎性小体在恶性肿瘤患者发生凝血功能紊乱、血栓形成过程中的作用，为肿瘤患者血栓的治疗提供新的思路和理论基础。
方法:
1、肿瘤患者易出现细菌感染，鞭毛蛋白是细菌鞭毛主要结构成分。在体内细菌鞭毛蛋白通过巨噬细胞吞噬作用而进入胞浆，在体外研究中，我们建立了LFn-PA运输系统将嗜肺军团菌鞭毛蛋白运输至胞浆中。应用凝血酶(PT)测定实验，凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)定量检测试剂盒，血小板计数仪等检测凝血发生。
2、应用Western blot检测纤维蛋白(Fibrin)，Caspase-1和组织因子(TF)蛋白质水平的表达。
3、应用乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)检测细胞死亡。
4、应用氯磷酸脂质体清除体内巨噬细胞，进行巨噬细胞功能研究。
5、应用抗TF抗体中和TF及可诱导的TF基因缺陷小鼠，从而研究TF的作用。
6、应用Caspase-1/11-/-及Gsdmd-/-小鼠研究Caspase-1和Gsdmd的作用。
7、应用化疗药物激活胰腺癌细胞内caspase-1。
8、应用小鼠下腔静脉狭窄模型研究TF对血栓形成影响。
结果:
1、细菌鞭毛蛋白能引起凝血反应，具体表现为血浆PT延长，TAT水平升高，血小板数量下降，以及纤维蛋白在组织的沉积。
2、凝血反应在caspase-1基因敲除小鼠体内消失，表明凝血反应依赖炎性小体活化。
3、凝血反应在使用氯膦酸脂质体清除体内巨噬细胞后消失，提示巨噬细胞在凝血反应中承担重要作用。
4、TF阳性微粒在凝血反应过程中被释放。使用抗TF抗体或TF基因敲除小鼠后凝血反应减少。
5、凝血反应在GSDMD基因敲除小鼠体内消失，表明凝血反应依赖于细胞焦亡。
6、胰腺癌细胞经过化疗药物处理后发生caspase-1的活化，细胞焦亡以及炎症因子的释放。
7、胰腺癌细胞经过化疗药物处理后释放TF阳性微粒，释放的TF阳性微粒增加深静脉血栓形成。
结论:
感染过程中，炎性小体被鞭毛蛋白直接激活，引起巨噬细胞焦亡，导致TF阳性微粒的释放，从而产生致死性凝血反应和血栓形成。此外，胰腺癌细胞经过化疗药物处理后激活炎性小体，发生细胞焦亡，释放TF阳性微粒，从而增加深静脉血栓形成，提示炎性小体可能在肿瘤患者凝血功能紊乱治疗中的价值。
肿瘤患者住院期间由于感染、化疗等因素促进了血栓发生风险，导致患者死亡率明显增加。炎性小体(Inflammasomes)是由细胞内模式识别受体参与组装形成的多蛋白复合体，在经过多种类型的病原体或危险信号激活后，能活化caspase-1，从而引起细胞焦亡(pyroptosis)，促进炎性细胞因子的分泌，该过程在体内免疫反应监视和清除病原体中起着非常重要的作用。本研究拟探讨炎性小体在恶性肿瘤患者发生凝血功能紊乱、血栓形成过程中的作用，为肿瘤患者血栓的治疗提供新的思路和理论基础。
方法:
1、肿瘤患者易出现细菌感染，鞭毛蛋白是细菌鞭毛主要结构成分。在体内细菌鞭毛蛋白通过巨噬细胞吞噬作用而进入胞浆，在体外研究中，我们建立了LFn-PA运输系统将嗜肺军团菌鞭毛蛋白运输至胞浆中。应用凝血酶(PT)测定实验，凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)定量检测试剂盒，血小板计数仪等检测凝血发生。
2、应用Western blot检测纤维蛋白(Fibrin)，Caspase-1和组织因子(TF)蛋白质水平的表达。
3、应用乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)检测细胞死亡。
4、应用氯磷酸脂质体清除体内巨噬细胞，进行巨噬细胞功能研究。
5、应用抗TF抗体中和TF及可诱导的TF基因缺陷小鼠，从而研究TF的作用。
6、应用Caspase-1/11-/-及Gsdmd-/-小鼠研究Caspase-1和Gsdmd的作用。
7、应用化疗药物激活胰腺癌细胞内caspase-1。
8、应用小鼠下腔静脉狭窄模型研究TF对血栓形成影响。
结果:
1、细菌鞭毛蛋白能引起凝血反应，具体表现为血浆PT延长，TAT水平升高，血小板数量下降，以及纤维蛋白在组织的沉积。
2、凝血反应在caspase-1基因敲除小鼠体内消失，表明凝血反应依赖炎性小体活化。
3、凝血反应在使用氯膦酸脂质体清除体内巨噬细胞后消失，提示巨噬细胞在凝血反应中承担重要作用。
4、TF阳性微粒在凝血反应过程中被释放。使用抗TF抗体或TF基因敲除小鼠后凝血反应减少。
5、凝血反应在GSDMD基因敲除小鼠体内消失，表明凝血反应依赖于细胞焦亡。
6、胰腺癌细胞经过化疗药物处理后发生caspase-1的活化，细胞焦亡以及炎症因子的释放。
7、胰腺癌细胞经过化疗药物处理后释放TF阳性微粒，释放的TF阳性微粒增加深静脉血栓形成。
结论:
感染过程中，炎性小体被鞭毛蛋白直接激活，引起巨噬细胞焦亡，导致TF阳性微粒的释放，从而产生致死性凝血反应和血栓形成。此外，胰腺癌细胞经过化疗药物处理后激活炎性小体，发生细胞焦亡，释放TF阳性微粒，从而增加深静脉血栓形成，提示炎性小体可能在肿瘤患者凝血功能紊乱治疗中的价值。