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猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是一种能引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道系统疾病的烈性传染病,现已成为规模化养猪场的主要疫病之一。由于该病会干扰猪的正常免疫系统,导致猪瘟疫苗免疫效果不是很理想,所以很容易和猪瘟发生混合感染,如果不能及时控制,往往会导致猪的大批死亡,给养猪户带来巨大的经济损失。为探讨机体不同CSFV免疫状态对免疫HP-PRRSV(TJM-F92)弱毒疫苗诱导细胞免疫应答的影响,本研究采用无特定病原的动物进行试验,建立猪瘟与猪繁殖与呼吸综合征双重免疫模型,对两种疫苗免疫后不同时间其血清及外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液中三种细胞因子的动态水平变化进行了初步研究。设计如下试验,从某一无PRRS感染史的种猪场采集52份无临床症状的3周龄断奶仔猪血液样品,用ELISA试剂盒检测其CSFV抗体,再用PRRSV ELISA试剂盒检测CSFV抗体阴性血液样本中的PRRSV抗体状态,确定出PRRSV和CSFV抗体均为阴性的仔猪22头。在此基础上对选取的22头仔猪血液样本用RT-PCR法进一步检测PRRSV、CSFV,再进行PCV2和PRV抗原检测,最终确定22份样品均无上述四种病毒感染。从中随机选择生产性能及健康状况相近的15头作为研究对象。给所有15头仔猪在25日龄时经肌肉注射接种猪瘟C株弱毒活疫苗,单独饲养于灭菌猪舍中,饲喂的饲料和所用工具都经过IACUC认可,猪瘟免疫14d时对所有仔猪再经颈部肌肉注射1mL(抗原量106TCID50/mL)HP-PRRSV(TJM-F92)活疫苗。分别于PRRSV免疫后的第14d和28d对试验猪前腔静脉采血分离血清和PBMC,用ELISA方法测定血清CSFV、PRRSV抗体和IL-10、IL-12p40、TNF-α3种不同细胞因子的含量。分离的PBMC在PHA刺激下体外培养24h后收集上清液用竞争抑制ELISA测定IL-10、IL-12p40的浓度和固相夹心ELISA测定TNF-α因子的浓度。根据CSFV抗体测定结果,把CSFV抗体阳性组称为CSFV高抗体组,CSFV抗体阴性组称为CSFV低抗体组。结合PRRSV抗体测定结果对试验动物再进一步分组,其中CSFV高抗体组分为:PRRSV高抗和PRRSV低抗体组,CSFV低抗体组同样也分为PRRSV高抗和PRRSV低抗体组。采用单因素方差(One-Way ANOVA)分析和最小显著性差异法(LSD)比较不同抗体水平的组间血清及PBMC培养上清液中各细胞因子浓度差异。结果显示,第28d时PRRSV抗体阳性率由14d的6.67%上升到80%;PRRSV疫苗免疫后14d和28d时各组中血清及PBMC培养上清液中IL-10、IL-12p40、TNF-α三种细胞因子的水平无显著差异(p>0.05);在CSFV高抗体组中无论PRRSV抗体高低,28d时血清及PBMC培养上清液中IL-10浓度显著低于14d的水平(p<0.01),而IL-12p40水平显著高于14d的水平(p<0.01);28d时各组中血清及PBMC培养上清液中TNF-α浓度高于14d的水平(p<0.05)。研究结果表明,CSF免疫试验猪接种PRRS nsp2Δ1882-2241弱毒疫苗后,大部分猪只的细胞免疫应答正常,且CSFV免疫状态良好时可以促进PRRSV(TJM-F92)弱毒疫苗在体内产生良好的细胞免疫应答;14d时PRRS体液免疫没有达到保护的情况下,已有细胞因子的应答,提示PRRS细胞免疫产生早于体液免疫;28d时PRRSV抗体水平较高且阳性率达到80%,可以作为对PRRSVTJM-F92活疫苗抗体水平监测的时间点,且用28d的PRRSV抗体水平评价疫苗免疫效果比14d更合适;IL-12p40水平显著上调,IL-10水平显著下调都是PRRSV基因缺失疫苗发挥效力的重要机制,TNF-α在其中也发挥一定的作用。本研究首先建立非特异状态下(免疫猪瘟疫苗)免疫HP-PRRSV(TJM-F92)活疫苗的试验动物模型,通过分析比较不同猪瘟免疫状态下猪对PRRSV特异的细胞因子的应答特征,找出非特异状态下这几种细胞因子与PRRSV免疫过程的相关性,为进一步研究PRRS的致病规律、免疫调节机制以及PRRS免疫后细胞免疫应答机制提供科学依据。