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口蹄疫（Foot-and-Mouth Disease，FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus，FMDV）引起的牛、羊、猪等偶蹄动物感染的一种烈性传染病，该病的发生和流行严重危害畜牧业的健康持续发展，造成巨大的经济损失，因此世界各国相当重视对该病的研究和防治。口蹄疫病毒衣壳由VP1、VP2、VP3、VP4 4种结构蛋白各60个拷贝组成，其中VP1蛋白又称1D蛋白，其基因位于基因组的2977-3615位，编码213个氨基酸，VP1暴露在病毒颗粒的表面，是诱导产生中和抗体的主要成分。 本试验以口蹄疫病毒的细胞培养毒为材料，通过RT-PCR方法获得了此株病毒结构基因的核苷酸序列，同法获得了口蹄疫疫苗株结构基因的核苷酸序列。对此株口蹄疫病毒与参考毒株的VP1、VP2、VP3、VP4的各核苷酸序列进行了比较，发现主要差异在可以诱导产生中和抗体的VP1上，根据VP1基因序列绘制系统进化树（国际上通用VP1基因绘制系统进化树），发现此株病毒属于O型FMDV的SEA拓扑型。将此株口蹄疫病毒与口蹄疫疫苗株进行比较发现，VP1完全相同，差异在VP2、VP3上。 以已经构建好的pMD18-T-VP1质粒为模板，PCR扩增得到FMDV VP1目的基因，将目的基因克隆到pMD18-T载体中，转化宿主菌TG1后得到重组质粒pMD18-T-VP1，测序证明此VP1基因序列准确无误。对重组质粒pMD18-T-VP1和原核表达载体pET-30a（+）分别以相同的限制性内切酶SacⅠ和HindⅢ消化，经连接酶连接，转化宿主菌TG1，筛选出阳性克隆pET-30a（+）-VP1。随后将此阳性质粒pET-30a（+）-VP1转化宿主菌BL21（DE3）pLysS中，经IPTG诱导VP1基因的表达，收集不同时间的菌液进行SDS-PAGE、Western blotting分析和dot-ELISA分析，结果表明VP1基因在大肠杆菌中获得了高效表达，表达的目的蛋白的分子量约为34ku，但表达产物未检测到抗原性。 对重组质粒pMD18-T-VP1和真核表达载体pBlueBacHis2A分别以相同的限制性内切酶SacⅠ和HindⅢ消化后，经连接酶连接，转化宿主菌TG1，筛选出阳性克隆pBlueBacHis2A-VP1。将pBlueBacHis2A-VP1质粒与Bac-N-BlueTM DNA共转染Sf9昆虫细胞，噬斑筛选重组病毒，将纯化的重组病毒感染Sf9细胞，表达了32.6ku目的蛋白条带，dot-ELISA分析表明表达产物具有抗原性。 以真核表达的融合蛋白为包被抗原建立了间接ELISA方法，用来检测动物体内FMD的抗体水平。