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研究背景：系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus, SLE）是一种典型的可累及全身多系统的自身免疫性疾病，以自身抗体的产生、免疫复合物的形成以及免疫介导的组织损伤为特征。免疫调控紊乱是SLE发生的重要环节，自身抗体的出现、免疫复合物的异常沉积造成狼疮性肾炎等多器官损害[1]。然而，其发病机制目前仍未明确，可能与遗传、环境、感染等因素有关。迄今为止，大量研究已证实，SLE患者体内显著累积的自身抗原来源于凋亡细胞，特别是外周血淋巴细胞的凋亡率明显增高，其凋亡的异常可能是由于凋亡细胞清除的缺陷造成，而其具体机制尚未完全明确[2]。细胞凋亡的异常来源于细胞内凋亡信号转导的紊乱。目前已有研究证实，SLE患者外周血淋巴细胞中凋亡信号转导通路存在明显紊乱，大量凋亡相关信号分子表达异常，导致凋亡与抗凋亡信号明显失衡，细胞凋亡异常增加。但其中凋亡相关信号分子的表达异常及其确切的信号机制尚不完全明确。大量研究证实，调节性T细胞（regulatory T cell, Treg）的免疫调控障碍、数量缺乏或功能缺陷是SLE免疫失衡、自身耐受打破从而进一步发展为自身免疫性疾病的关键环节[3]。研究显示，SLE中Treg细胞频率减少、功能受抑是导致其免疫调控失衡的重要因素。SLE患者外周血Treg细胞数量较正常对照显著降低，其频率与SLE患者疾病活动指数呈明显负相关。显著减少的Treg细胞不能有效抑制体内抗原提呈细胞（antigen presenting cell, APC）对自身抗原的呈递，导致效应性T细胞及自身反应性淋巴细胞异常活化、自身抗体大量产生、免疫调控失衡[4]。在前期研究中，我们通过联合长标签基因表达分析技术（long serial analysis of geneexpression, Long SAGE）、基因芯片及大样本临床分析，发现了一个新的促凋亡分子BclG_L的表达在SLE患者外周血CD4~+T细胞中明显增高。BclG_L在淋巴细胞内相对高表达，并对淋巴细胞的增殖、活化、存活具有重要的调控作用[5]；此后我们通过基因转导技术进一步证实了BclG_L对SLE CD4~+T细胞凋亡增加的促进作用[6]。然而，BclG_L在SLE患者外周血单一核细胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）中的整体表达情况及其对SLE患者CD4~+T细胞的主要细胞亚群CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg凋亡的影响却不得而知。新近研究显示，Ⅰ型干扰素（interferon-alpha, IFN-α）是SLE免疫调控紊乱中的重要始动因子，其在SLE患者外周血中水平明显增高，与SLE疾病活动度显著相关[7]；同时，其信号调控的异常导致PBMC中IFN-α调控基因的异常活化，细胞免疫功能明显改变[8]。目前有研究证实，IFN-α可明显抑制SLE中Treg细胞的免疫调控作用，诱发效应性T细胞异常增殖与活化[9]，但其抑制机制尚不明确。因此，作为IFN诱导基因（IFN-inducible genes, IFIGs）的BclG_L分子是否也可被SLE患者外周血中高水平的IFN-α诱导上调，在SLE细胞凋亡增加中发挥作用？本研究进一步通过检测不同活动期SLE患者PBMC以及Treg细胞中BclG_L的表达量，分析其与SLE患者PBMC和Treg细胞凋亡率、血清中IFN-α含量及患者临床指标的相关性，从而明确BclG_L表达异常对SLE患者中PBMC和Treg细胞凋亡的影响及其在SLE疾病发生中的作用。目的：探讨系统性红斑狼疮患者PBMC及Treg细胞中凋亡调控分子BclG_L的表达差异及其与PBMC和Treg细胞凋亡率、患者血清IFN-α水平以及患者临床指标的相关性，为SLE的治疗提供新的理论依据。方法：流式细胞仪检测20例活动期SLE患者（A-SLE）、18例非活动期SLE患者（I-SLE）以及30例健康对照者PBMC中的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞频率，并检测分选后CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的纯度；用膜联蛋白V–异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V–FITC/PI)细胞凋亡双染试剂盒检测各组PBMC和Treg细胞早期凋亡率；实时荧光定量PCR（real-time PCR）技术检测各组PBMC及Treg细胞中BclG_LmRNA的表达量；蛋白质印迹法（Western blot, WB）检测BclG_L蛋白表达量；酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）检测各组血清中IFN-α水平；采用SPSS13.0统计软件进行组间非参数Mann-Whitney或Kruskal-Wallis检验，结果均以±s表示，并使用Pearson相关性分析法分析SLE患者PBMC和Treg细胞中BclG_L表达量与细胞凋亡率、IFN-α水平以及SLE患者临床指标间的相关性。结果：1. SLE患者与健康对照外周血PBMC中的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞频率的比较。A-SLE患者PBMC中的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞频率低于I-SLE患者及健康对照组，但I-SLE患者与健康对照组差异无统计学意义。2.磁珠分选后Treg细胞纯度通过CD4~+CD25~+CD127low免疫磁珠分选后得到CD4~+CD25~+CD127lowTreg细胞。流式细胞仪检测CD4~+T细胞纯度为>97%，检测CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞纯度为>85%。3. SLE患者与健康对照组外周血PBMC及Treg细胞凋亡率的比较A-SLE与I-SLE患者组PBMC凋亡率高于健康对照组，各组间差异均有统计学意义。A-SLE患者组Treg细胞凋亡率高于I-SLE组与健康对照组，而I-SLE组与健康对照组间差异无统计学意义。4. SLE患者及健康对照PBMC及Treg细胞中BclG_LmRNA及蛋白表达量的比较与健康对照组相比，A-SLE和I-SLE患者PBMC及Treg细胞中BclG_LmRNA表达均增高，其中以A-SLE患者较为显著。A-SLE患者PBMC中BclG_L蛋白表达量较I-SLE患者及健康对照组均增高，且I-SLE患者BclG_L蛋白表达量也高于健康对照组。5. SLE患者与健康对照组外周血血清中IFN-α含量相比显著增高。6. SLE患者PBMC和Treg细胞中BclG_L表达量与PBMC和Treg细胞凋亡率、IFN-α水平及患者临床指标间的相关性分析除了SLE患者外周血Treg细胞中BclG_L mRNA表达量与患者抗核抗体（antinuclear antibody, ANA）滴度无明显相关关系外，患者PBMC和Treg细胞中BclG_LmRNA表达量分别与PBMC和Treg细胞凋亡率、SLE患者疾病活动程度评分（systemiclupus erythematosus disease activity index, SLEDAI）、ANA滴度及外周血IFN-α含量呈正相关，与SLE患者补体C3水平呈负相关。结论：1. SLE患者外周血PBMC中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞频率减少，PBMC及Treg细胞凋亡均显著增加，且BclG_L表达明显上调，说明BclG_L可能通过促进PBMC及Treg细胞凋亡而在SLE发病中起一定的作用。2. SLE患者PBMC和Treg中BclG_L表达增加，且与PBMC和Treg细胞凋亡率及SLEDAI评分、ANA滴度正相关，与补体C3水平负相关，在一定程度上可以反映SLE患者的疾病活动性。3. IFN-α是SLE免疫调控紊乱中的重要始动因子，SLE患者血清中IFN-α含量增高，且与患者PBMC及Treg细胞中BclG_L的表达呈正相关，提示IFN-α可通过上调BclG_L表达而促进PBMC及Treg细胞凋亡，从而导致SLE免疫失衡，引起SLE的发病。