【摘 要】
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G蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptors, GPCRs)家族参与了机体内多种生理过程的调节,是治疗多种人类疾病的主要药物靶点。检测G蛋白偶联受体活化后第二信使cAMP和Ca2+
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G蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptors, GPCRs)家族参与了机体内多种生理过程的调节,是治疗多种人类疾病的主要药物靶点。检测G蛋白偶联受体活化后第二信使cAMP和Ca2+信号可用于研究受体激动剂活性、信号通路及受体功能研究,并应用于G蛋白偶联受体药物筛选和研发。本论文构建了新型的双反应元件、双报告基因检测系统CRE-rLuc/NFAT-fLuc,可同时检测胞内cAMP和Ca2+信号变化。试验检测了6个功能差异(即偶联不同亚型G蛋白)的G蛋白偶联受体：昆虫脂动激素受体(AKHR)、人源大麻受体1、2(CB1、CB2)、人源组胺受体1、3(H1R、H3R)、人源烟酸受体(HM74a)、人源胰高血糖素样肽1(GLP-1),结果所得的已知激动剂引起相应受体cAMP和Ca2+的EC50与文献一致,且cAMP和Ca2+信号特征与经典胞内cAMP和钙流检测法测得的结果一致,充分证明了该方法的可行性与灵敏性。应用该检测系统,初步检测了各类抑制剂对受体cAMP和Ca2+信号通路的影响,及共表达不同受体的信号整合效果。该检测系统方便快速、灵敏定量的特性可进一步用于细胞水平上G蛋白偶联受体的功能检测及高通量药物筛选。
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