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叶酸(Folic acid)是一种重要的B族维生素，是体内生化反应中一碳单位的传递体，与许多重要的生化过程密切相关，直接影响核酸的合成及氨基酸代谢，对细胞分裂、增殖和组织生长具有极其重要的作用。叶酸缺乏不仅会引起人类巨幼红细胞贫血，还与神经管畸形、肿瘤、心血管疾病等相关。因此，叶酸在膳食中的重要性日益为人们认识，婴幼儿食品、老年食品、孕产妇食品中已经开始强化叶酸。 在人体内叶酸携带一碳单位形成5-甲基四氢叶酸(5-Methyltetrahydrofolic Acid)、亚甲基四氢叶酸等活性形式发挥作用，其中5-甲基四氢叶酸是人体内活性叶酸的主要存在形式。 用反相高效液相荧光检测方法检测食品中的叶酸和人体内红细胞中5-甲基四氢叶酸有重要意义。本研究建立叶酸与5-甲基四氢叶酸的反相高效液相荧光法检测方法，并应用于食品中叶酸与人体红细胞中5-甲基四氢叶酸的检测，为准确测定食品中的叶酸和健康成年人、健康老年人与糖尿病老年人的红细胞中5-甲基四氢叶酸水平的研究提供有利的条件。 1．叶酸的反相高效液相-柱后衍生荧光检测方法的研究及应用 采用GOLD高效液相色谱仪，选刚ODSC18的反相色谱柱，带预柱保护，柱温30℃；流动相采用50mM的磷酸二氢钾溶液，PH值为3.5，乙腈含量12％，流速1ml/min；柱后衍生剂0.5％的过二硫酸钾溶液，流速0.3ml/min，反应温度60℃；进样量20μl；荧光检测波长激发波长365nm，发射波长450nm；样品处理方法用60％高氯酸溶液上脂去蛋白，然后离心、进样检测；最低检出浓度为5ng/ml，浓度线性范围为0.1μg／ml～3.2μg/ml，相关系数为0.9999，回收率为98.07％，变异系数为2.31％；样品检测中叶酸能与杂质完全分开，适用于食品中叶酸含量的测定。 2．红细胞中5-甲基四氢叶酸的反相高效液相荧光检测方法的研究及应用 采用GOLD高效液相色谱仪，选用ODSC18的反相色谱柱，带预柱保护，柱温25℃；流动相采用50mM的磷酸二氢钾溶液，PH值为2.5，乙腈含量8％，流速1ml／min；进样量为20μl；；荧光检测波长激发波长295nm，发射波长356nm；样品处理方法为新鲜血样用10g／L抗坏血酸溶液保存并在37℃水浴作用90 min后加入60％高氯酸去浙江大学硕士学位论文 中文摘要蛋白，然后离心进样检测；最低检出浓度为 0．oing／ml，浓度线性范围为 10 us；。。l～100us／ml，相关系数为0．9999，回收率为100．67％，变异系数为3．SS％；血样品检测中5－甲基四氢叶酸能与其他成分完全分升，健康成年人、健康老年人、糖尿病老年人的红细胞中卜甲基四氢叶酸分别为 175．07土72．90 u g／L、145．94土86．04 u s／L、140．8卫士56．15 u g／l。。结论： 应用柱后衍生－反相高效液相荧光检测方法测定食品中叶酸和反相高效液相关光检测方法测定人的红细胞中5－甲基四氢叶酸的方法均具有简单、快速、准确的优点，而且灵敏度高，回收率高，线性关系好，重复性好，样品处理较简单，有重要的应用价值，对叶酸强化食品以及不同人群的红细胞中5－甲基四氢叶酸的检测有重要意义。