CDC14B在牛卵母细胞成熟和早期胚胎发育中的表达研究

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细胞分裂周期蛋白14B(CDC14B)是丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶家族成员之一,其在真核生物中能够下调CDK的活性,促进细胞分裂和有丝分裂的退出,对细胞周期调控具有重要作用。本研究检测了牛卵母细胞成熟及胚胎早期发育过程中CDC14B的表达和定位。CDC14B的表达检测结果表明,在卵母细胞成熟过程中,CDC14B mRNA相对表达量和蛋白表达水平在MⅡ期低于GV期。受精后,相对于MⅡ期,CDC14B mRNA表达在2-cell期、4-cell期和8-cell期有所增加,但仍低于GV期,到囊胚期降到最低;CDC14B蛋白表达水平在2-cell期有所增加,4-cell期、8-cell期明显减少,到囊胚期CDC14B的表达再次增加。免疫荧光技术检测CDC14B的定位,结果显示,CDC14B在GV期无明显定位,在AI-TI、MⅡ期与纺锤体共定位。在2-cell期、4-cell期、8-cell期胚胎,主要定位于皮层、细胞间接触部分和核周围。本研究结果表明,CDC14B在减数分裂过程中与微管蛋白共定位,可能参与卵母细胞减数分裂调节;而在早期胚胎发育中定位在皮层、细胞接触部分和核周围,表明其参与有丝分裂的调节,并可能与卵裂中的胞质分裂有关。  本研究构建了CDC14B的过表达载体pCDC14B-cDNA-3.1(+),利用电转染法将过表达载体导入牛胎儿成纤维细胞,通过Real-time PCR检测瞬时转染后牛胎儿成纤维细胞中CDC14BmRNA的表达,结果显示CDC14B mRNA表达升高。对过表达CDC14B的成纤维细胞进一步培养发现,转入pCDC14B-cDNA-3.1(+)载体后的细胞与对照组相比,细胞形态发生改变,生长缓慢,而且细胞脱壁死亡的数量增多。说明CDC14B的过表达影响了牛胎儿成纤维细胞的生长。综上所述,CDC14B在牛卵母细胞体外成熟培养和早期胚胎发育过程中的表达和定位呈现动态变化,表明CDC14B参与细胞分裂的调节,其对细胞周期调节的具体作用及机制有待进一步研究。
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