论文部分内容阅读
大豆异黄酮是近年来大豆中最引人注目的大豆功能成分之一。对其提取及功能性的研究受到世界各国的关注。本试验以提取纯化高品质的大豆异黄酮为主要试验目的，力图寻找最经济的提取纯化方法。 通过化学及光谱法对提取物进行定性鉴定，证明了大豆异黄酮的存在。并比较了单波长法、三波长法及高效液相色谱法三种定量方法的优缺点。 以豆粕为原料提取大豆异黄酮时，根据有较高提取率、易于回收、无副作用等要求，采用乙醇水溶液为提取剂。在以提取率为指标时，得到浸取最优条件为：以80％的乙醇水溶液，25：1的物料比，在60℃下提取9小时（浸取率为92.6％）。如考虑到经济效益，则物料比采用20：1（浸取率为91.8％）。研究利用微波预处理豆粕时发现，微波处理4min后，大豆异黄酮的溶出率显著增加，且提取液纯度也略有提高，并可将物料比减少至15：1。 将提取液浓缩后，利用正己烷萃取提取液中的脂溶性物质，然后分别测定在浓缩物中加入不同体积的20％的三氯乙酸及2mol／L的盐酸的除蛋白效果，结果显示盐酸为较佳的除蛋白试剂。浓缩液除蛋白后用大孔树脂法继续进行纯化，将三种备用树脂的性能进行比较后，选择XAD-4为纯化用树脂。通过单因素试验选择出适宜的上样条件：上样温度为40℃，流速2BV／h，1.58L／L树脂为最适进样量。然后在25℃下用蒸馏水进行洗涤以除去水溶性杂质。最后，利用梯度洗脱方法将大豆异黄酮由树脂柱上洗脱下来。以大豆异黄酮的得率为指标时，对梯度洗脱时的洗脱温度、洗脱流速两个影响因素进行回归分析，得到方程y=19.8802+2.4854x1-0.02020x12；最佳洗脱条件为60℃，1.04BV／h。在上述最佳条件下，对大豆异黄酮进行洗脱其得率为：97.10±1.2％。将洗脱液浓缩成固形物，其纯度为56.43％。以分离度为指标时，利用间断式梯度洗脱方法，在纯化的同时实现异黄酮混合物一定程度上的分离。 以大豆乳清为原料提取纯化大豆异黄酮时，首先利用微波对大豆乳清进行预处理。用该方法处理后蛋白质清除率为66.12±1.46％，异黄酮损失率为5.95±0.94％。然后用大孔树脂将大豆异黄酮吸附，从而使其由乳清中分离出来。大豆异黄酮浓度为40.92mg／L的大豆乳清的最佳进样量为4.10L／L树脂。分别以25℃的蒸馏水及浓度为20％的乙醇水溶液清洗除杂后，在60℃下，以1.04BV／h的流速对大豆乳清中的异黄酮进行洗脱，其得率为96.81％。 根据对产品的不同要求，还可以进行脱色及重结晶处理。最佳脱色条件为：在80℃下，加入15g／L的活性炭，脱色时间10min。重结晶条件为：加入等体积的冰块于大豆异黄酮丙酮溶液中，并将其放入冰箱中冷藏过夜。重结晶后产品纯度提高至91.3％，得率为19.6％。 最后，通过四种常用抗氧化体外模型试验对试验制得的异黄酮精制物的抗氧化功能性质进行了验证。结果显示：（1）在适宜的浓度范围内染料木黄酮糖苷（Gen），大豆石冬冬 摘要 东北农业大学昔（Dai）及总黄酮，都能有效的抑制肝组织匀浆的体外脂质过氧化。其中，以Gen抑制作川最强。当异黄酮的浓度超出一定范围后，它们的抗氧化能力减弱。（2）三种试验样品对人体的血细胞膜都有较强的保护作用，并在较高浓度时仍具有抗溶血活性。 （3）在适宜的浓度范围内Gen，Dai和总黄酮都具有较强的超氧阴离于自由基清除作用，且Gen和 Dai的清除能力比较接近，但当异黄酮形成的酚氧自由基达到一定的浓度时，即表现出一定的助氧化能力。（4）Gen、Dai及总黄酮与羟基自由基作用形成的酚氧自由基稳定性很高，当溶液中大豆异黄酮的浓度很高时仍能保持其抗氧化活性。