【摘 要】
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桑树种质资源中存在不同的生态类型,各生态类型都具有不同的形态特征。利用桑树的不同生态类型和经济性状,不仅可以保证蚕桑生产的稳步发展,而且可以应用于城市园林的观赏配
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桑树种质资源中存在不同的生态类型,各生态类型都具有不同的形态特征。利用桑树的不同生态类型和经济性状,不仅可以保证蚕桑生产的稳步发展,而且可以应用于城市园林的观赏配置和防风固沙的生态建设。从桑树资源中筛选抗性种质,从中克隆抗性(寒、冻、旱、盐)基因,并将抗寒品种中的低温诱导蛋白基因导入抗寒性弱的园林树种,从而提高南方树种的抗冻性,这将为许多园林植物提供更广阔的利用空间,为城市的绿化工程提供更多的选择。本文以桑树低温诱导蛋白基因(Wap25)为研究对象,首先利用生物信息学的方法对WAP25蛋白序列进行了初步分析,得到了蛋白质组学研究中一些有价值的参数。结果表明:Wap25为胚胎后期富集蛋白(LEA)基因的成员之一,与其它物种低温诱导基因的同源性很低。它由226个氨基酸组成,分子质量25.3 kD,等电点5.52;蛋白N端1-30位氨基酸表现出强烈的疏水性,其后是亲水性高的区域,平均亲水值达-1.020,而蛋白1-29位氨基酸为典型的真核生物蛋白质的信号肽序列,表明WAP25蛋白属于分泌型蛋白。其次,实验将目的基因Wap25克隆到原核表达载体pGEX-4T-2上,在大肠杆菌中获得成功表达,并以不同载体pET-28a为对照,在不同IPTG浓度、不同时间和不同温度的条件下进行比较。结果表明由于目的蛋白的表达量低,造成目的带增加不明显。然后再将Wap25基因克隆到真核表达载体上,利用基因枪法将目的基因导入洋葱表皮细胞,在激光扫描共聚焦显微镜下观察WAP25蛋白的亚细胞定位,结果表明该蛋白定位于细胞质中。实验后期利用干扰载体和目的基因构建RNA干扰表达载体pRNAi-pA7-GFP-Wap25,企求利用基因枪技术导入受体细胞中,由此验证桑树低温诱导蛋白基因的生物功能。
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