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目的：本研究通过比较微波、超声波和二者联合应用对人牙的脱钙效果，寻找一种快速有效的牙齿脱钙方法；通过检测犬乳恒牙替换时期乳牙牙根及根周组织内多种细胞RANKL的表达情况、检测RANKL在人乳牙根生理性吸收区蛋白及mRNA的表达情况、以及检测乳牙根生理性吸收不同时期RANKL的表达情况，探讨RANKL对破牙细胞的作用及表达RANKL的相关细胞与破牙细胞的关系，揭示RANKL在乳牙根生理性吸收过程中所起的作用，为乳牙根生理性吸收机制的研究提供有益参考。
方法：①将3对前磨牙制成12个试件，分别应用常规方法、超声波法、微波法、微波超声联合法，在室温下用10％乙二胺四乙酸二钠脱钙。通过检测脱钙残液中钙质量浓度及电镜下观察脱钙后牙片表面结构变化，评价几种脱钙方法及其不同脱钙时间的脱钙效果。②分别采用免疫组织化学方法和原位杂交方法检测犬乳恒牙替换时期破牙细胞、牙髓成纤维细胞、牙周韧带成纤维细胞、成牙本质细胞、成釉细胞以及牙囊组织中RANKL的表达；⑧用人乳牙根生理性吸收期的下颌乳前牙作为实验组，因正畸需要拔除的前磨牙作为对照组。在HE染色下观察乳牙根生理性吸收的组织学变化，同时分别运用免疫组织化学方法和原位杂交的方法并借助Image-Pro-Plux软件分析系统测量乳牙根生理性吸收过程中破牙细胞、牙髓成纤维细胞、牙周韧带成纤维细胞、成牙本质细胞以及恒牙相应细胞中RANKL蛋白的光密度值，并进行统计学分析；④运用抗酒石酸酸性磷酸酶染色的方法观察破牙细胞在人乳牙牙根生理性吸收不同时期中数量的变化；再运用原位杂交方法检测RANKL在该过程中不同时期的表达情况。
结果：①不同脱钙方法的脱钙效果明显不同，组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。微波超声联合组脱钙残液中，钙质量浓度高于微波组、超声组和常规组(P<0.01)，且脱钙均匀；微波组钙质量浓度高于超声组和常规组(P<0.01)，但脱钙均匀程度不如超声组；超声组高于常规组(P<0.01)，常规组表面脱钙最不均匀；各种方法组内不同时间脱钙效果比较，差异有统计学意义(P<0.01)。②RANKL的阳性信号广泛表达于犬乳恒牙替换期破牙细胞、破骨细胞、成牙本质细胞、成骨细胞、成纤维细胞、牙胚钟状期颈环未分化细胞、成釉细胞及釉质基质中；③免疫组织化学染色结果显示人乳牙的破牙细胞、牙髓成纤维细胞及成牙本质细胞胞浆中RANKL染色阳性，且表达高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；乳牙牙周韧带成纤维细胞RANKL 染色亦阳性，但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；原位杂交染色结果显示，实验组乳牙破牙细胞RANKL mRNA染色弱阳性，牙髓成纤维细胞、成牙本质细胞、牙周韧带成纤维细胞RANKL mRNA染色阳性，实验组与对照组RANKL 光密度值差别有统计学意义(P<0.05)；④乳牙牙根生理性吸收的早、中、晚期破牙细胞TRAP染色呈棕黄色，且各期 TRAP(+)细胞数量呈现先升高后下降的趋势，其差异有统计学意义(P<0.05)；乳牙牙根生理性吸收不同时期破牙细胞胞浆RANKL原位杂交染色显棕黄色，并见少量胞核着色，牙髓成纤维细胞、成牙本质细胞RANKL 原位杂交染色亦阳性，且吸收早期与吸收中、晚期比较RANKL的表达差异有统计学意义(P<0.05)，而吸收中期和吸收晚期RANKL 的表达差异无统计学意义(P>0.05)。
结论：①微波超声波联合组牙齿脱钙效果最佳，超声组、微波组次之，常规对照组脱钙效果最差；②RANKL参与了犬乳恒牙替换时期乳牙根和牙槽骨的吸收、恒牙胚的发育；③RANKL在人乳牙牙根生理性吸收区有表达，说明其在人乳牙根生理性吸收过程中起重要作用；④人乳牙根生理性吸收不同时期破牙细胞RANKL原位杂交染色有差别，染色强度反应了各期破牙细胞的功能状态；人乳牙根生理性吸收不同时期破牙细胞数量的差异与RANKL在各细胞中的强弱变化基本一致，进一步提示RANKL参与了破牙细胞性牙根生理性吸收，且能促进破牙细胞的分化。