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目的：FruA是黏细菌中决定发育早期细胞定向聚集和后期细胞分化的C信号通路中的一种信号转导蛋白，调节一系列发育基因的表达，遗传学证据提示FruA可以磷酸化，但是迄今为止仍缺少FruA磷酸化的直接生化证据。本研究采用遗传学方法筛查FruA相互作用蛋白，寻找使FruA磷酸化的候选激酶或其它调节因子，以进一步完善与粘细菌发育分化密切相关的C信号转导通路。
方法：利用酵母双杂交的方法从黏细菌基因组文库中筛选与FruA相互作用的蛋白。通过限制性内切酶部分消化黏细菌基因组，回收500—3000bp片段随机插入pGADT7载体，将基因组随机片段与酵母转录因子GAL4 AD编码基因融合。连接反应液电穿孔导入大肠杆菌，构建黏细菌基因组文库。将fruA完整的编码序列及删除DNA结合结构域后的不完整编码序列分别插入pGBKT7载体，构建两个诱饵质粒pGBKT7-fruA和pGBKT7-fruAΔBD。以两个诱饵质粒分别对黏细菌基因组文库进行筛选，初次获得的阳性克隆利用三个报告基因经遗传学复筛后，再选择一部分阳性克隆进行GST—pulldown体外相互作用验证。
结果：以pGADT7载体构建了含有约十万个重组克隆的粘细菌基因组文库；以pGBKT7-fruA ΔBD为诱饵质粒，经酵母双杂交初筛、复筛获得9个阳性克隆；以pGBKT7一力-uA为诱饵质粒，经酵母双杂交初筛、复筛获得1个阳性克隆。对阳性克隆的插入片段进行DNA序列分析，其中一个克隆编码黏细菌丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Pknl，另一个克隆编码黏细菌组氨酸蛋白激酶CheA3。其余插入片段的功能不清楚，在数据库中比对检索，其余8个未发现与已知激酶结构域同源的序列。对Pkrll和CheA3在内的四个阳性克隆的体外GST-pulldown试验中，Pknl和CheA3，以及克隆D表现有阳性信号。
结论：利用酵母双杂交筛选到与FruA具有相互作用的两种不同类型的蛋白激酶Pknl和CheA3，它们可能是FrLlA的候选激酶。黏细菌发育阶段FruA的磷酸化可能存在复杂的调节机制，涉及一种以上蛋白激酶的参与。