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背景和目的:
人体的正常免疫系统是识别和抵抗疾病的主要生物防御体系。正常情况下，该系统对人体内的各种组织器官不产生免疫反应，但在多种因素的刺激下，机体的免疫功能紊乱，造成免疫系统的多种细胞功能及其分泌的因子失调而产生疾病。自身免疫性疾病是由于机体正常免疫耐受功能受损导致免疫细胞及其成分对自身组织结构和功能的破坏，并出现一定临床表现的一类疾病。自身免疫性疾病累及全身各个系统，而且大多为慢性疾病。研究表明，免疫自稳失常就会导致自身免疫性疾病的发生，而T细胞在许多自身免疫性疾病发病中起着关键性的作用。
近年研究发现，许多人类器官特异性自身免疫病及其动物模型的受累器官中，浸润的T淋巴细胞上的TCR Vβ有几种处于优势，带有相同或相似TCR的这些T淋巴细胞，可能是受自身抗原的招募并对自身抗原产生了特异性反应，是致病性T细胞。由于这些致病性自身反应性T细胞带有相同或相似的TCR，因此，如果以这些优势利用的TCR为靶子来杀伤特异性的T细胞克隆，则既可以破坏产生异常反应的T细胞，又能最大限度地保护机体正常的免疫功能，可以说是一种理想的治疗自身免疫性疾病的方法。目前针对TCR的治疗方法包括T细胞疫苗、TCR肽疫苗、TCR核酸疫苗、抗TCR单克隆抗体治疗等。其中TCR DNA疫苗通过在机体内部表达抗原蛋白，诱发机体针对致病性T细胞表面抗原受体产生特异性免疫应答，选择性地杀伤致病性T细胞或使其失活而发挥治疗作用，并且具有特异性强、安全性好、制备简单的特点。
类风湿关节炎(RA)是一种以持久性滑膜炎、软骨和骨的破坏为主的自身免疫病，其发病机制尚未明确，目前倾向于是一种自身抗原反应性T细胞扩增引起的自身免疫病。直接抑制RA的自身反应性T细胞是治疗该病的根本措施之一。以往有用抗T细胞表面抗原CD4、TCR的单克隆抗体和免疫抑制剂等进行治疗的研究和临床应用，虽有一定疗效，但均属非特异性疗法，会造成机体T细胞功能的全面抑制。特异性治疗是治疗RA的一个发展方向。目前，许多实验已证实在RA患者关节滑膜和滑液内均有特异性活化的抗原反应性T淋巴细胞浸润，并且发现在同-RA患者的多关节内有共同的TCR．Vβ克隆型。但目前国内外尚没有对RA用针对TCRVp克隆型的DNA疫苗进行治疗的报道。胶原诱导性关节炎(CIA)模型是DE．Trentham等于1977年创立的由具有种属特异性的II型胶原免疫后所诱发的实验动物模型，因其遗传背景和免疫病理学改变与临床RA极为相似而成为目前研究RA较为理想的动物模型。CIA与免疫反应密切相关。许多实验已经证实细胞与体液免疫反应共同参与了CIA的发生与发展，但自身反应性T细胞的活化是引起CIA组织损伤的主要启动因素。因此抑制自身反应性T细胞不仅可以抑制T细胞介导的细胞免疫，也有助于抑制B细胞介导的体液免疫。
本工作研究含有编码TCR Vβ5.2和TCR Vβ8.2基因片段的DNA疫苗对CIA大鼠的保护性作用。该研究是在本实验室使用Lewis近交系大鼠CIA动物模型，分析出其双后肢足关节中聚集的致病性优势T细胞TCR Vβ克隆型为TCR Vβ8.2和TCR Vβ5.2，并用pTargeT质粒作为真核表达载体构建了TCR Vβ5.2和‘TCRVβ8.2重组DNA疫苗的基础上，利用牛II型胶原诱导雌性Lewis近交系大鼠制备RA动物模型，用TCR Vβ5.2和TCR Vβ8.2重组DNA疫苗对其进行免疫，观察疫苗的保护性作用，并探讨其作用效果及机理，以期为进一步探讨人RA新的免疫调节治疗方法及TCR DNA疫苗的研究提供一定的实验基础。
实验方法:
(1)大量纯化制备重组DNA疫苗pTargeT-TCR Vβ5.2、pTargeT-TCRVβ8．2和空质粒pTargeT；
(2)建立Lewis大鼠的CIA模型；
(3)观察重组DNA疫苗对CIA大鼠的保护效果，包括关节炎指数评分、大鼠后肢足关节的病理学分析、用ELISPOT法观察脾细胞分泌的IFN-γ和IL-4平的改变、用流式细胞术分析外周血CD4<+>T细胞和CD8<+>T细胞亚群及其比值的变化、用ELISA法测定血清中抗CⅡ抗体水平的改变等；
(4)取大鼠的注射部位肌肉组织，用RT-PCR及免疫组化染色法检测目的基因的转录和表达情况。
结论:
重组DNA疫苗pTargeT-FCR Vβ5．2和pTargeT-TCR Vβ8．2能明显减轻CIA大鼠的关节炎症状和体征，且二者联合应用效果更佳。该项研究为进一步探讨TCR DNA疫苗治疗实验性关节炎以及在了解RA发病机制方面提供了一定的实验基础。