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目的构建针对ILK基因的特异性siRNA表达质粒,转染人膀胱癌BIU-87细胞,并检测其对人膀胱癌BIU-87细胞生长及凋亡的影响。方法构建针对ILK基因的特异性siRNA表达质粒siRNA ILK及对照质粒siRNA-NC;将siRNA ILK及siRNA-NC分别转染膀胱癌BIU-87细胞,G418筛选稳定表达细胞株,并分别命名为BIU-87 si ILK及BIU-87 vector,并经RT-PCR,Western Blot及细胞免疫荧光检测ILK的表达变化;采用Am-Blue法比较BIU-87,BIU-87 si ILK及BIU-87 vector细胞的增殖能力并绘制生长曲线, Tunel细胞凋亡检测试剂盒检测各组细胞的凋亡,流式细胞术分析各组细胞的细胞周期及凋亡率,细胞免疫荧光检测p-Akt和p-GSK 3β的表达水平;Western Blot检测下游信号通路分子及凋亡相关蛋白Akt, p-Akt, GSK 3(α/β), p-GSK 3β,β-catenin, Caspase 3, Bax及Bcl-2的表达水平;激光共聚焦显微镜观察各组细胞中RI的表达水平及共定位。将BIU-87,BIU-87 si ILK及BIU-87 vector细胞分别注射至裸鼠背部皮下,30天后处死裸鼠,取出瘤组织并称重;HE染色观察瘤组织的形态学改变;CD31抗体检测肿瘤微血管密度变化;免疫组织化学检测各组瘤组织中ILK, p-Akt,p-GSK-3β,β-catenin及RI蛋白的表达差异;Tunel细胞凋亡检测试剂盒检测各组瘤组织中的细胞凋亡率。结果经测序证实ILK基因的siRNA表达质粒siRNA ILK及对照质粒siRNA-NC构建成功,RT-PCR,Western Blot及免疫细胞荧光分析BIU-87细胞中ILK基因的RNAi效果显示,siRNA ILK能显著地抑制ILK基因的表达(P<0.05),而siRNA-NC中ILK的表达无明显变化(P>0.05),表明成功获得稳定表达细胞株,即BIU-87 si ILK及BIU-87 vector细胞; Am-Blue结果显示BIU-87 si ILK细胞较BIU-87 vector及BIU-87细胞增殖能力明显降低;Tunel细胞凋亡检测结果证实BIU-87 si ILK细胞较BIU-87 vector和BIU-87细胞凋亡明显增加;流式细胞分析结果表明BIU-87 si ILK细胞生长停滞于G1期,细胞凋亡率明显增高;细胞免疫荧光结果显示,BIU-87 si ILK细胞中p-Akt和p-GSK 3β的表达较BIU-87 vector和BIU-87细胞明显减少(P<0.05),Western Blot显示,与BIU-87细胞相比,BIU-87 si ILK细胞中p-Akt, p-GSK 3β,β-catenin及Bcl-2的表达明显减少(P<0.05),Caspase 3和Bax蛋白的表达明显增加(P<0.05),Akt, GSK 3(α/β)蛋白的表达无明显变化(P>0.05);激光共聚焦显微镜观察显示,ILK和RI均位于细胞质,BIU-87 si ILK细胞中RI的表达较BIU-87 vector和BIU-87细胞明显增加(P<0.05)。与BIU-87组相比,BIU-87 si ILK组裸鼠的瘤重显著降低(P<0.05),抑瘤率为64.73%,BIU-87 vector组无显著差异(P>0.05), HE染色显示,BIU-87 si ILK组癌细胞较其它两组体积减小,核质比例明显缩小,核分裂相显著减少;BIU-87 si ILK组中CD31阳性细胞(棕黄色染色)较其他两组明显减少甚至无血管出现;免疫组化结果显示,p-Akt,p-GSK3β及RI蛋白均位于细胞质,BIU-87 si ILK组中p-Akt和p-GSK3β较BIU-87和BIU-87 vector组明显减少,RI明显增加。Tunel细胞凋亡检测结果表明,BIU-87 siILK组中凋亡细胞较其他两组明显增加。结论成功构建针对ILK基因的特异性siRNA表达质粒,并通过调控p-Akt, p-GSK-3β,β-catenin, Caspase 3, Bax及Bcl-2蛋白的表达抑制BIU-87细胞的增殖并促进其凋亡;裸鼠实验证实ILK siRNA能显著抑制BIU-87细胞在体内的生长能力,其机制可能与ILK siRNA降低p-Akt, p-GSK-3β,β-catenin蛋白的表达有关。