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目的： 细胞色素P450酶作为人体重要的Ⅰ相药物代谢系统,其活性可被许多药物诱导或抑制,产生药物间相互作用。本论文通过考察四逆汤不同配伍组成对肝药酶的影响,探讨基于肝细胞色素P450的四逆汤减毒配伍规律。
方法： (1)药酶诱导剂对生附子毒性的影响:测定生附子的LD50;测定苯巴比妥(PB)干预3天后生附子的LD50;比较PB干预及未干预大鼠给予生附子后大鼠室性早搏发生率、出现时间及恢复率情况,考察PB干预对生附子心脏毒性的影响。(2)建立同时检测4种细胞色素P450亚型酶探针药物的RP-HPLC方法:使用非那西丁、氨苯砜、奥美拉唑、氯唑沙宗作为CYP1A2、3A4、2C19、2E1的探针底物,以安替比林为内标,建立同时测定血清中4种探针药物的RP-HPLC方法,并进行方法学考察。(3)四逆汤不同配伍对肝药酶的影响:Wistar大鼠,连续灌胃10天四逆汤不同配伍组分后,“Cocktail”药物探针法检测大鼠CYP1A2、3A4、2C19、2E1酶活性;RT-PCR方法检测大鼠肝脏CYP1A2、3A2、2E1-mRNA表达:免疫组化法检测大鼠肝脏CYP1A2、3A2、2E1蛋白表达。
结果：(1)药酶诱导剂对生附子毒性的影响:小鼠给予生附子的LD50值为7.15g/kg.d,95％可信限为6.19～8.29g/kg.d,PB干预后,小鼠给予生附子的LD50＞12.08g/kg.d:与单用生附子相比,PB干预可显著减少生附子致大鼠室性早搏的发生率(P＜0.01),延长出现时间(P＜0.01),缩短持续时间(P＜0.01);(2)建立同时检测4种探针药物的“Cocktail”探针药物法:建立了同时检测血清中4种探针药物的RP-HPLC分析方法,此方法在有效血药浓度范围内线性良好,快速、准确、灵敏度高、专属性强,符合生物样品分析的要求,可用于检测主要CYP450同工酶的活性。(3)四逆汤不同配伍对肝药酶活性的影响:炙甘草、干姜与生附子合用后,均不同程度的减弱了生附子对CYP1A2、3A4、2C19酶活性的诱导趋势;四逆汤全方对CYP1A2、2C19、2E1的酶活性均表现出诱导趋势,对CYP3A4活性表现出抑制趋势。
结论：(1)典型的细胞色素P450诱导剂苯巴比妥干预可以显著降低生附子毒性;(2)生附子、生附子+干姜对CYP2C19酶活性有明显的诱导作用(P＜0.05);(3)生附子、生附子+干姜对CYP1A2、3A4、2E1酶活性表现出诱导或抑制趋势,未见统计学意义;(4)其余各组对CYP1A2、3A4、2C19、2E1活性的影响有诱导或抑制趋势,未见明显的统计学意义。具体机制有待进一步的研究。