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目的：对前期实验筛选的抗RSV病毒效果较好的全蝎白术白头翁、全蝎白术蛴螬、全蝎白术白头翁蛴螬三种组合发酵组方，进一步选用多种病毒包括RSV、EV71、COX-B2，进行体外抗病毒活性筛选，以确定具有最佳抗病毒效果的中药组合发酵物；对其发酵及提取工艺进行优化；并对中药组合发酵物的体内抗病毒活性及机制进行研究；探究该组合物发酵前后主要成分的含量差异，为药用真菌发酵中药及其组合物的研究提供新思路。
方法：1.对全蝎白术白头翁、全蝎白术蛴螬、全蝎白术白头翁蛴螬三种组合发酵组方，分别进行超声水提、50%醇回流提取、50%醇超声提取、80%醇回流提取，采用MTT法测定各不同提取物对RSV、EV71和COX-B2病毒的抑制作用，确定具有最优抗病毒效果的中药组合发酵物及提取方法。
2.以总蛋白和总多糖的综合评分为指标，考察发酵温度、发酵厚度和发酵时间三个因素对球孢白僵菌发酵的影响，优化中药组合物的发酵工艺，并考察在最优发酵时间下，光照和含水量对孢子萌发率的影响。
3.以体外抗病毒的治疗指数TI为评价指标，通过响应面法对提取时间、料液比和乙醇浓度三个因素对药理活性的影响进行考察，从而确定中药组合发酵物的最佳提取条件。
4.建立RSV病毒小鼠模型，将中药组合发酵物分为大、中、小三个剂量组进行体内抗病毒活性实验，采用ELISA检测方法，对小鼠血清肿瘤坏死因子（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）、一氧化氮（NO）浓度进行检测，探究其体内抗RSV病毒的作用机制。
5.通过改良Lowry法、苯酚-硫酸法、NaNO2-AlCl3-NaOH比色法及定磷法分别测定中药组合物发酵前后蛋白、多糖、黄酮及核酸的含量，并采用Tricine-SDS-PAGE电泳法比较中药组合物最佳提取条件下发酵前后蛋白质分子量的变化。
结果：1.全蝎白术蛴螬中药组合发酵物50%醇超声提取液体外抗病毒效果最好。
2.全蝎白术蛴螬中药组合物最优发酵工艺为：发酵温度25℃，发酵厚度2cm，发酵时间216h，光照条件昼：夜为12h：12h，培养基含水量300%。
3.全蝎白术蛴螬中药组合物最优提取工艺为：提取时间150min，提取料液比为1：40，乙醇浓度50%，在此提取条件下，治疗指数TI为45.82。
4.体内实验中，全蝎白术蛴螬中药组合发酵物高中低剂量组的肺指数均低于模型组，表现出良好的抗病毒效果；该组合发酵物能显著提高病毒小鼠血清TNF-α、IFN-γ和NO水平，提示抗病毒机制与增强免疫有关。
5.发酵前蛋白、多糖、黄酮及核酸的含量依次为49.49mg/g、123.94mg/g、2.02mg/g及15.78mg/g；发酵后蛋白、多糖、黄酮及核酸的含量依次为76.30mg/g、163.62mg/g、2.86mg/g及38.38mg/g；发酵后蛋白分子量与发酵前相比明显变小。
结论：通过多种病毒筛选了具有较好抗病毒活性的全蝎白术蛴螬中药组合发酵物，确定了其最佳发酵工艺和提取工艺，证实了该中药组合发酵物的体内抗病毒疗效，机制与增强免疫有关。全蝎白术蛴螬中药组合物经发酵后蛋白、多糖及核酸含量均提高，蛋白质分子量下降。
方法：1.对全蝎白术白头翁、全蝎白术蛴螬、全蝎白术白头翁蛴螬三种组合发酵组方，分别进行超声水提、50%醇回流提取、50%醇超声提取、80%醇回流提取，采用MTT法测定各不同提取物对RSV、EV71和COX-B2病毒的抑制作用，确定具有最优抗病毒效果的中药组合发酵物及提取方法。
2.以总蛋白和总多糖的综合评分为指标，考察发酵温度、发酵厚度和发酵时间三个因素对球孢白僵菌发酵的影响，优化中药组合物的发酵工艺，并考察在最优发酵时间下，光照和含水量对孢子萌发率的影响。
3.以体外抗病毒的治疗指数TI为评价指标，通过响应面法对提取时间、料液比和乙醇浓度三个因素对药理活性的影响进行考察，从而确定中药组合发酵物的最佳提取条件。
4.建立RSV病毒小鼠模型，将中药组合发酵物分为大、中、小三个剂量组进行体内抗病毒活性实验，采用ELISA检测方法，对小鼠血清肿瘤坏死因子（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）、一氧化氮（NO）浓度进行检测，探究其体内抗RSV病毒的作用机制。
5.通过改良Lowry法、苯酚-硫酸法、NaNO2-AlCl3-NaOH比色法及定磷法分别测定中药组合物发酵前后蛋白、多糖、黄酮及核酸的含量，并采用Tricine-SDS-PAGE电泳法比较中药组合物最佳提取条件下发酵前后蛋白质分子量的变化。
结果：1.全蝎白术蛴螬中药组合发酵物50%醇超声提取液体外抗病毒效果最好。
2.全蝎白术蛴螬中药组合物最优发酵工艺为：发酵温度25℃，发酵厚度2cm，发酵时间216h，光照条件昼：夜为12h：12h，培养基含水量300%。
3.全蝎白术蛴螬中药组合物最优提取工艺为：提取时间150min，提取料液比为1：40，乙醇浓度50%，在此提取条件下，治疗指数TI为45.82。
4.体内实验中，全蝎白术蛴螬中药组合发酵物高中低剂量组的肺指数均低于模型组，表现出良好的抗病毒效果；该组合发酵物能显著提高病毒小鼠血清TNF-α、IFN-γ和NO水平，提示抗病毒机制与增强免疫有关。
5.发酵前蛋白、多糖、黄酮及核酸的含量依次为49.49mg/g、123.94mg/g、2.02mg/g及15.78mg/g；发酵后蛋白、多糖、黄酮及核酸的含量依次为76.30mg/g、163.62mg/g、2.86mg/g及38.38mg/g；发酵后蛋白分子量与发酵前相比明显变小。
结论：通过多种病毒筛选了具有较好抗病毒活性的全蝎白术蛴螬中药组合发酵物，确定了其最佳发酵工艺和提取工艺，证实了该中药组合发酵物的体内抗病毒疗效，机制与增强免疫有关。全蝎白术蛴螬中药组合物经发酵后蛋白、多糖及核酸含量均提高，蛋白质分子量下降。