论文部分内容阅读
目的：观察蛋白酶体抑制剂MGl32联合顺铂对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响，同时检测Hela细胞内GST-x的表达。
方法：(1)倒置显微镜观察24小时时细胞形态学变化并摄片：对照组：DMSO处理；顺铂组： 2.5μg/ml的顺柏加DMSO处理；MG132组：5μg/ml的MG132处理；MG132联合顺铂组：2.5μg/ml的顺铂加5μg/ml的MG132处理。(因MG132采用DMS0配制，所以对照组和顺铂组均加入同等浓度DMSO，各组比较时可排除DMSO对细胞的影响)。
(2)四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检~UHela细胞抑制率：
对照组1：含小牛血清的1640培养基处理24、48、72小时；
顺铂组：分别采用1.0μg/ml、2.5μg/ml、5.0μg/ml、10.0μg/ml的顺铂处理Hela细胞24、48、72小时；
对照组2：DMSO处理24、48小时；MG132组：用5μg/ml蛋白酶体抑制剂MG132处理Hela细胞24、48小时；
MG132联合顺铂组：用1.0μg/ml、2.5μg/ml、5.0μg/ml、10.0μg/ml的顺铂分别加5μg/ml蛋白酶体抑制剂MG132处理Hela细胞24、48小时。
(3)流式细胞术分析48小时时Hela细胞凋亡率及细胞周期：对照组：DMSO处理；顺铂组： 2.5μg/ml的顺铂2HDMSO处理；MG132组：5μg/ml的MG132处理；MG132联合顺铂组：2.5μg/ml的顺铂加5μg/ml的MG132处理。
(4)免疫细胞化学SP法检测24小时时Hela细胞内GST-π的表达：对照组：DMSO处理；顺铂组：2.5μg/ml的顺铂2HDMSO处理；MG132联合顺铂组：2.5μg/ml的顺铂加5μg/ml的MGl32处理。
结果：
(1)倒置显微镜观察细胞形态学变化：对照组细胞生长状态良好，细胞伸展、透亮，呈不规则对角形，细胞接触紧密；顺铂组细胞数目减少，胞浆内出现空泡，体积缩小，变圆，细胞间隙增大；MG132联合顺铂组细胞数目减少更加明显，视野内可见大量悬浮的凋亡细胞。
(2)四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测Hela细胞抑制率：
与对照组1活力比较，顺铂组(不同浓度)的抑制率分别为：(24h)8.79％±0.49％、16.5670±0.93％、20.13％±1.22％、29.82％±1.34％；(48h)19.55％±1.23％、30.76％±0.66％、40.11％±0.99％、65.02％±0.83％；(72h)25.27％±1.19％、40.02％±0.76％、54.63％±0.58％、80.19％±0.69％；随顺铂浓度升高Hela细胞抑制率增高，不同浓度顺铂组HeLa细胞增殖抑制率差异有统计学意义(P<0.05)；随顺铂作用时间延长，HeLa细胞细胞增殖抑制率明显增高，且各组之间的差异有统计学意义(P<0.05)，顺铂处理浓度与处理时间之间具有交互作用(P<0.05)；与对照组2活力比较，MG132组的抑制率为：(24h)21.50％±1.01％，(48h)70.40％±2.17％；MG132联合顺铂组的抑制率分别为：(24h)63.21％±0.98％、66.98％±0.78％、70.21％±1.56％、87.19％±1.77％：(48h)78.88％±0.89％、86.69％±0.54％、92.76％±1.36％、95.28％±1.21％，MG132联合顺铂组对Hela细胞的增殖抑制率显著高于顺铂组和MG132组，差异有统计学意义(P<0.05)。
(3)流式细胞术分析Hela细胞凋亡率及细胞周期：对照组为0.96％±0.25％；顺铂组为38.77％±1.17％；MG132组为12.15％±0.52％；MG132联合顺铂组为90.12％±0.95％。MG132与顺铂联合能有效诱导Hela细胞凋亡，其诱导的凋亡率显著高于对照组、顺铂组及MG132组，差异有统计学意义(P<0.05)。MG132联合顺铂组S期细胞百分数显著增加，各组细胞周期分布差异具有统计学意义(P<0.05)。
(4)免疫细胞化学SP法检测Hela细胞内GST-π的表达：MG132联合顺铂组与对照组、顺铂组比较，HeLa细胞中GST-π的表达明显下调，差异有统计学意义(P<0.05)。
结论：
1．蛋白酶体抑制剂MG132能增强顺铂对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。
2．蛋白酶体抑制剂MG132与顺铂联用能降低Hela细胞内GST-л的表达，这可能与MG132增加Hela细胞对顺铂的敏感性有关。