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本论文对血管抑素重组菌E. coli M15( pQE32-AGN)的发酵条件和培养基组成进行了优化研究,并对发酵目的产物—rhAGN包涵体进行了变性溶解以及复性的初步探讨。在摇瓶条件下,以提高rhAGN的产量为主要目标,采用LB培养基对E. coli M15 ( pQE32-AGN) 重组菌的生长及产物表达规律进行了探索,确定了最佳发酵条件为:摇瓶装液量20 ml/250 ml,接种量为5 %,培养温度为37 oC,初始pH 7.0,OD600为0.8～1.0时开始诱导,诱导持续时间为6 h,诱导剂浓度为0.1 mmol/L,此时,菌体干重为1.20 g/L,目的蛋白占菌体总蛋白的35 %,rhAGN的表达量达到560 mg/L。 在上述发酵条件优化的基础上,采用单因子试验及正交试验,对重组菌的发酵培养基成分进行了优化,确定了优化后的合成培养基组成为:无水葡萄糖1 %,(NH4)2SO4 0.4 %,NaCl 0.2 %, KH2PO4 0.3 %,K2HPO4·3H2O 2 % ,Mg SO4 0.01 %,盐酸硫胺素0.4 mg/L ,核黄素0.1 mg/L,盐酸吡哆醇0.6 mg/L,D-泛酸0.3 ml/L, FeSO4·7H2O 30 mg/L, Li2SO4·H2O 30 mg/L,MnSO4·H2O 25 mg/L,Zn(CH3COO)2·2H2O 20 mg/L,Al2(SO4)3·18H2O 9 mg/L。利用此合成培养基进行5 L罐的发酵试验,菌体干重由摇瓶下的3.02 g/L提高到8.06 g/L,同时,试验表明,菌体浓度提高后,目的蛋白的表达未受影响,依然稳定在35%左右,rhAGN的表达量达到2.51g/L。研究了细胞破碎与包涵体溶解有关的影响因素,确定了细胞超声破碎的适宜作用条件为:菌悬液浓度80 mg菌体/mL、功率400 W、破碎时间10 min(工作20 sec,间隔5 sec,共30个循环);变性缓冲液的组成为8 mol/L尿素、50 mmol/L Tris-HCl、20 mmol/L DTT、pH 8.0。对包涵体溶解液采用稀释法、透析法及色谱法进行了复性初步研究, 试验结果表明,蛋白纯度对复性效果没有影响,pH对复性的影响比较大;透析法、离子交换色谱、疏水色谱不适于rhAGN的复性;凝胶过滤色谱的复性效果较好,在蛋白浓度4.28 ug/mL时对HEMC细胞的抑制活性即达到50.10 %,此时活性蛋白总收率为55.15 %,并且在复性的同时实现了重组蛋白的有效纯化。