【摘 要】
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赤潮也称红潮,通常是指由于一些海洋浮游生物在水体中过度繁殖或聚集而使海水变色的现象。赤潮特别是有害赤潮造成了严重的生态环境问题,给水产养殖业和滨海旅游业造成了巨大
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赤潮也称红潮,通常是指由于一些海洋浮游生物在水体中过度繁殖或聚集而使海水变色的现象。赤潮特别是有害赤潮造成了严重的生态环境问题,给水产养殖业和滨海旅游业造成了巨大损失,并可直接危害人类健康。研究赤潮,进而预防和控制赤潮,首先要对引发赤潮的生物种类进行准确鉴定并对自然水域的赤潮生物进行监控,并建立赤潮藻的快速定性与定量检测方法。本研究以共生甲藻,赤潮异湾藻,海洋原甲藻为材料,结合PCR-DGGE(聚合酶链式反应—变性梯度凝胶电泳)方法与RT-PCR(实时荧光定量)方法进行定性定量研究。根据共生甲藻,赤潮异湾藻,海洋原甲藻核糖体基因的18S rDNA部分序列设计了一对通用引物,然后优化PCR反应条件得到扩增片段,通过DGGE分析成功的分离了混合藻,得到三种藻的DGGE图谱,从而证明PCR-DGGE技术是对微藻群进行鉴定的有效方法。针对共生甲藻,赤潮异湾藻,海洋原甲藻核糖体基因的rDNA序列ITS区分别设计了各个藻种的特异引物,经BLASTn比对和实验室现有赤潮藻种的普通PCR扩增验证了其特异性。利用]RT-PCR测得的CT值对细胞密度的对数值作图,得到标准曲线,并且通过模拟现场试验验证了标准曲线的可靠性,荧光定量方法检测结果与传统的显微镜观测结果没有数量级的差别。藻细胞或裂解液直接用作PCR模板,不仅能够减少检测程序,缩短检测时间,而且在进行RT-PCR检测时能避免DNA的损失,从而使定量更准确。
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