论文部分内容阅读
目的：通过研究鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠体内中性粒细胞在不同时间点凋亡的情况，并以两种不同剂量的重组IL-17a进行干预治疗，通过检测不同时间点中性粒细胞凋亡率，caspase-3的活性及凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax蛋白的表达情况，，血浆中可溶性Fas及炎症因子IL-17的浓度，并观察肝肺组织HE染色后的病理变化，探讨重组IL-17a对鲍曼不动杆菌中性粒细胞凋亡的影响并其可能的机制。方法：1、将90只清洁级健康成年雄性wistar大鼠随机分成9组：正常对照组（N），鲍曼不动杆菌脓毒症12h、24h组(S12h、S24h），鲍曼不动杆菌脓毒症+生理盐水组（S12h+NS、S24h+NS），重组IL-17低剂量治疗12h、24h组(S12h+L、S24h+L），重组IL-17高剂量治疗12h、24h组(S12h+H、S24h+H）。正常对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水，而鲍曼不动杆菌脓毒症各组及干预治疗各组大鼠分别腹腔注射鲍曼不动杆菌悬液；重组IL-17低剂量高剂量治疗各组大鼠尾静脉分别注射rIL-17a0.001μg、1μg，余各组（鲍曼不动杆菌脓毒症+生理盐水组12h,24h），大鼠尾静脉注射等量生理盐水。2、正常组、不同时间点鲍曼不动杆菌脓毒症组及rIL-17a治疗组大鼠颈动脉采血后取肝肺组织，用密度梯度离心法提取中性粒细胞，并分离血浆，通过形态学观察和DNA片段化的检测分析其凋亡情况，用AnnexinV-FITC和PI双染法检测中性粒细胞凋亡的变化，用分光光度法检测中性粒细胞Caspase3酶活性，ELISA检测血浆中炎症因子IL-17及可溶性Fas含量的变化，蛋白免疫印迹法检测中性粒细胞Bax，Bcl-2蛋白的表达，HE染色法观察肝和肺组织病理改变。结果：1、与正常对照组相比，鲍曼不动杆菌脓毒症各组中性粒细胞凋亡率较正常对照组明显降低（p＜0.05），与其他各组比较，尾静脉注射脓毒症大鼠高剂rIL-17相同时间点明显抑制PMN凋亡（p＜0.05），鲍曼不动杆菌脓毒症+生理盐水组与脓毒症组比较无明显差异（p＞0.05）；2、中性粒细胞DNA电泳结果显示高剂量IL-1712h,24h出现梯状电泳图谱，其他各组DNA电泳条带均在加样孔附近；3、与其他各组中性粒细胞的Caspase3的活性比较，较高剂量IL-17组12h,24h的caspase-3活性较其他各组均明显升高（p＜0.05），而较低剂量IL-17组12h,24h的caspase-3活性较其他组低（p＜0.05），鲍曼不动杆菌脓毒症+生理盐水组与脓毒症组比较Caspase3活性无明显变化（p＞0.05）；4、各组S-Fas的水平比较，低剂量IL-17组，12h,24h较其他组高（p＜0.05），高剂量IL-17组，12h,24h较其他组低（p＜0.05），鲍曼不动杆菌脓毒症+生理盐水组与脓毒症组比较无明显差异（p＞0.05）；5、病理切片HE染色可见鲍曼不动杆菌脓毒症各组肝脏组织炎症反应、细胞损伤较明显，低剂量组炎症反应最重，肝细胞有片状坏死，而高剂量组则较其减轻，正常对照组未见明显异常。6、与其它各组比较，中性粒细胞Westernblot结果：高剂量IL-17组12h,24h的PMN的Bax蛋白表达较其他组多（P＜0.05），低剂量IL-17组12h,24h的BAX表达较其他组少（p＜0.05），而对于PMN的BCL-2的蛋白的表达，高剂量组12h,24h较其他组低（p＜0.05），低剂量组较其他组高（P＜0.05），鲍曼不动杆菌脓毒症+生理盐水组与脓毒症组比较无明显差异（p＞0.05）。结论：1、用重组IL-17a适时适度地干预在鲍曼不动杆菌脓毒症各组大鼠中性粒细胞凋亡有可能成为治疗脓毒症的适宜措施；2、较高剂量的重组IL-17a可减轻鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠的炎症反应，较低剂量的重组IL-17a可加重鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠的炎症反应；3、高剂量rIL-17a可能通过促进Caspase3的活化，s-Fas蛋白的表达，发挥促进PMN凋亡的作用，低剂量rIL-17a可能通过抑制Caspase3的活化及s-Fas蛋白的表达，发挥抑制PMN凋亡的作用。