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目的: 溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis,UC)当前的主流治疗方案还是以药物维持缓解为主,常用的有氨基水杨酸盐、皮质类固醇和免疫调节剂等.但是长期使用此类药物存在着激素抵抗、药物依赖等问题,且由于腹泻症状导致普通的口服制剂的药效大大降低.因此,本研究制备了一种包载氧化苦参碱的NO供体脂质体制剂,通过给予DSS诱导的炎症小鼠药物治疗,并从结肠组织学改变、炎症因子的表达及其他炎症相关指标含量变化等方面探究氧化苦参碱-NO供体脂质体制剂对小鼠UC的治疗作用和可能的机制.旨在为UC的临床治疗提供一种新的思路和具有临床应用价值的治疗策略.
方法: 通过薄膜水化法制备空白脂质体,利用pH梯度法包载药物氧化苦参碱,高效液相法测定载药量.通过饮用DSS溶液建立实验性肠炎模型,考察正常组(control)、模型组(3%DSS)、游离氧化苦参碱组(OM)、TNO3胶束组(TN)、TNO3胶束+氧化苦参碱(TN+OM)物理混合组、氧化苦参碱脂质体组(OM@lip)、氧化苦参碱-TNO3脂质体组(OM@TN-lip)的结肠病变情况:用生理盐水清洗后称重、测长度并拍照;4%多聚甲醛固定制作病理切片;小鼠血清C反应蛋白(CRP)的含量、结肠组织髓过氧化物(MPO)、还原性谷胱甘肽(GSH)、活性氧(ROS)的含量、结肠组织炎症因子(TNF-α、 IFN-γ、IL-6、 COX-2、IL-1β)的在mRNA及蛋白表达水平的情况作为小鼠炎症程度的标准.
结果: 本研究成功制备了氧化苦参碱-NO供体脂质体,其粒径大小在200nm左右,电位在-15mV左右,载药量为70%.药物治疗结果表明,模型组小鼠的结肠长度为各组最短,重量最轻,结肠组织学评分为各组中最高,相比于正常组其血清CRP含量显著上升,MPO、ROS活性显著升高,GSH含量显著下降,结肠部位炎症因子的表达水平显著升高,炎症程度较高;游离药物组结肠长度和
重量与模型组差异不大,组织学评分较高,各炎症指标的结果与模型组无统计学差异(p＞0.05),治疗效果不理想,炎症程度相对较高;TNO3胶束组结果与模型组相比,结肠长度、重量有所增加,组织学评分有所降低,除了GSH这个指标无统计学差异外,其余各炎症相关指标都有所降低,炎症有所缓解,但总体缓解效果比较轻微.TN+OM物理混合组结肠长度和重量与正常组差别不大,与模型组相比组织学评分降低,血清CRP及炎症指标含量降低,但是与OM@lip和OM@TN-lip相比仍处于较高水平.OM@lip组的结肠长度和重量与正常组差别不大,组织学评分显著低于模型组,血清CRP及炎症相关指标含量显著降低,但比OM@TN-lip组高.OM@TN-lip组的结肠长度和重量几乎接近正常组,组织学评分为所有组别中最低值,血清CRP及炎症相关指标的含量与模型组相比有极显著差异(p＜0.01),证实小鼠UC得到较好的缓解,体系具有良好的UC治疗作用.
结论:氧化苦参碱-NO供体脂质体对小鼠结肠炎有较显著的缓解作用,其机制为通过抑制COX-2的合成,下调促炎介质MPO及炎症因子TNF-a、IFN-γ、IL-1β、IL-6的产生,并通过降低ROS活性调节氧化应激等方面达到缓解炎症症状的作用.
方法: 通过薄膜水化法制备空白脂质体,利用pH梯度法包载药物氧化苦参碱,高效液相法测定载药量.通过饮用DSS溶液建立实验性肠炎模型,考察正常组(control)、模型组(3%DSS)、游离氧化苦参碱组(OM)、TNO3胶束组(TN)、TNO3胶束+氧化苦参碱(TN+OM)物理混合组、氧化苦参碱脂质体组(OM@lip)、氧化苦参碱-TNO3脂质体组(OM@TN-lip)的结肠病变情况:用生理盐水清洗后称重、测长度并拍照;4%多聚甲醛固定制作病理切片;小鼠血清C反应蛋白(CRP)的含量、结肠组织髓过氧化物(MPO)、还原性谷胱甘肽(GSH)、活性氧(ROS)的含量、结肠组织炎症因子(TNF-α、 IFN-γ、IL-6、 COX-2、IL-1β)的在mRNA及蛋白表达水平的情况作为小鼠炎症程度的标准.
结果: 本研究成功制备了氧化苦参碱-NO供体脂质体,其粒径大小在200nm左右,电位在-15mV左右,载药量为70%.药物治疗结果表明,模型组小鼠的结肠长度为各组最短,重量最轻,结肠组织学评分为各组中最高,相比于正常组其血清CRP含量显著上升,MPO、ROS活性显著升高,GSH含量显著下降,结肠部位炎症因子的表达水平显著升高,炎症程度较高;游离药物组结肠长度和
重量与模型组差异不大,组织学评分较高,各炎症指标的结果与模型组无统计学差异(p＞0.05),治疗效果不理想,炎症程度相对较高;TNO3胶束组结果与模型组相比,结肠长度、重量有所增加,组织学评分有所降低,除了GSH这个指标无统计学差异外,其余各炎症相关指标都有所降低,炎症有所缓解,但总体缓解效果比较轻微.TN+OM物理混合组结肠长度和重量与正常组差别不大,与模型组相比组织学评分降低,血清CRP及炎症指标含量降低,但是与OM@lip和OM@TN-lip相比仍处于较高水平.OM@lip组的结肠长度和重量与正常组差别不大,组织学评分显著低于模型组,血清CRP及炎症相关指标含量显著降低,但比OM@TN-lip组高.OM@TN-lip组的结肠长度和重量几乎接近正常组,组织学评分为所有组别中最低值,血清CRP及炎症相关指标的含量与模型组相比有极显著差异(p＜0.01),证实小鼠UC得到较好的缓解,体系具有良好的UC治疗作用.
结论:氧化苦参碱-NO供体脂质体对小鼠结肠炎有较显著的缓解作用,其机制为通过抑制COX-2的合成,下调促炎介质MPO及炎症因子TNF-a、IFN-γ、IL-1β、IL-6的产生,并通过降低ROS活性调节氧化应激等方面达到缓解炎症症状的作用.