【摘 要】
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该文利用本实验室克隆的豌豆COP1cDNA,研究了豌豆的COP1蛋白及各个结构域蛋白的 生理功能和作用机理,并对不同来源COP1蛋白的保守性作了初步探讨.首先在大肠杆 菌中表达了GFP
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该文利用本实验室克隆的豌豆COP1cDNA,研究了豌豆的COP1蛋白及各个结构域蛋白的 生理功能和作用机理,并对不同来源COP1蛋白的保守性作了初步探讨.首先在大肠杆 菌中表达了GFPCOP1融合蛋白,制备了多克隆抗体并对抗体进行了纯化.根据豌豆COP1的蛋白结构设计四种不同的结构域基因片段,分别构建了这四个基因片段及COP1全基 因与GFP融合基因的植物表达载体,转入根癌农杆菌GV3101后分别转化烟草,获得了组成型表达这些外源基因的转基因烟草.通过对比分析这些外源基因在转基因烟草在的 过量表达所引起的表型变化,对豌豆COP1蛋白及不同结构域蛋白的生理功能进行了初 步研究.认为豌豆的COP1蛋白与拟南芥的COP1蛋白一样,也是高等植物光形态发生的 关键负调控因子,蛋白结构中的三个保守特征结构域在定过程中具有各不相同又相互 联系的特定生理功能.以GFP为报告基因,研究了这些外源蛋白在转基因烟草细胞中的亚细胞定位,发现豌豆COP1蛋白及不同结构域蛋白的核质分配情况与拟南芥COP1类似 ,也存在细胞类型特异性的光调节,各个不同结构域在核质分配过程中的作用也各不 相同,推测豌豆COP1蛋白在抑制光形态发生过程中可能遵循类似拟南芥COP1蛋白的作 用机理.
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