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肿瘤化学治疗最大障碍之一是肿瘤细胞对药物的耐受性。为了减少肿瘤耐药性的产生、降低药物毒副作用、增强药物疗效,一般采用联合用药。联合用药是近年来治疗肿瘤的重要进展之一,已成为肿瘤治疗的趋势,并得到广泛的应用。白藜芦醇(Resveratrol, RES)是植物产生的一种抗毒素,是非黄酮类多酚天然化合物,具有抗炎症、抗氧化、抗肿瘤等生物活性。白藜芦醇在抗肿瘤及心血管疾病方面具有非常巨大的应用价值。吉西他滨(Gemcitabine, GEM)化学名称为双氟脱氧胞苷,是脱氧胞嘧啶类似物,在细胞内活化后参入DNA合成,同时抑制核苷酸还原酶和脱氧胞嘧啶脱氨酶活性,是细胞周期特异性抗代谢类药物。本研究研探索了白藜芦醇增强吉西他滨体内外抗肿瘤疗效,及其增效作用的分子机制,为提高吉西他滨的临床抗肿瘤效果,减少不良反应发生提供指导意义。同时,对白藜芦醇增强DNA损伤药物抗肿瘤活性,及几个白藜芦醇新衍生物的抗肿瘤效果进行了初探性研究。1.RES增强GEM对多种细胞系的体外生长抑制作用我们选用低剂量吉西他滨与白藜芦醇联合作用于11种细胞,包括人正常细胞系：人胚肺成纤维细胞系2BS,人肝细胞系L02；人肿瘤细胞系：人肝癌细胞系HepG2和Bel-7402,人非小细胞肺癌细胞系A549,人结肠癌细胞系HCT116(包括p53野生型wild type, wt和p53突变型mutant,ko),人喉癌系KB及其耐药株KBV,人子宫颈癌细胞系HeLa；小鼠肝癌细胞系H22。我们发现RES不会增强GEM对正常细胞(2BS、L02)的生长抑制作用,即药物合用降低了GEM对正常细胞的毒性；RES与GEM合用除了对HeLa、HCT116 wt细胞没有增效作用,对其他几株细胞均有不同程度的协同增效作用,尤其对HepG2细胞的增效作用最为显著。20μM RES与0.5μM GEM联合用药指数CI值为0.52,具有显著协同增效作用。接下来我们在小鼠体内检测了RES联合GEM对H22移植瘤的体内生长抑制增效作用。结果表明RES(10 mg／kg)与GEM(25 mg／kg)低剂量合用,两药合用CI为0.73；RES(10 mg／kg)与GEM(50 mg／kg)高剂量合用,两药合用CI为0.56,RES与GEM合用体内抑瘤协同作用非常显著。2.RES增强GEM诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用我们使用染色质凝集、流式检测PI染色、western blot几种实验方法,证明了RES能增强GEM诱导HepG2细胞凋亡的作用。20μM RES使0.5μM GEM诱导的HepG2凋亡细胞比例显著升高。3.RES增强GEM诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用机制我们的研究发现RES能增强GEM体内外抗肝癌作用。接着我们进一步研究了增效作用的机制。结果表明RES增强GEM对HepG2细胞抑制作用不依赖于SIRT1、p53；RES增强GEM对HepG2细胞抑制作用与RES增强GEM诱导的HepG2细胞S期周期阻滞,及细胞内ROS水平升高有关；RES能下调HepG2内NF-KB表达水平,上调NF-κB抑制因子IκBα蛋白水平；且RES与GEM合用后,能显著下调NF-κB下游促存活靶蛋白：Survivin、Bcl-2、Bcl-xL、c-myc、Cyclin D1表达水平,上调促凋亡蛋白因子Bax蛋白水平,表明RES通过调节NF-κB及其靶蛋白水平来增强GEM对HepG2细胞凋亡的诱导作用。4.较低剂量下合用,RES增强GEM诱导肝癌HepG2细胞衰老样表型(SLP)发生我们使用低剂量RES(10μM)与低剂量GEM(0.05μM、0.1μM)和用处理HepG2细胞发现,在选用合用剂量下,RES没有增强GEM诱导的HepG2细胞凋亡,而是促使HepG2细胞衰老,生长停滞。因此低剂量下和用,RES同样增强了GEM对HepG2细胞的生长抑制作用。5.RES增强DNA损伤药物抗肿瘤活性接着我们又探索了RES与DNA损伤药物：博莱霉素(Bleomycin, BLM)、博安霉素(Boanmycin, BAM)、NC0604、多柔比星(DOX)联合用药对几株细胞的生长抑制作用。结果表明RES与博莱霉素家族抗生素联合作用于HepG2细胞,在一定浓度范围内具有协同增效作用,但增效作用并不显著；与DNA断裂药物DOX联合作用于HepG2细胞具有显著增效作用；RES与BAM、NC0604、DOX联用于Bel-7402细胞,也具有一定的协同增效作用,而RES与BAM联合用作用于HeLa细胞,CI值均大于1,表明两药合用拮抗,这与RES、GEM联合处理HeLa细胞结果相似,表明HeLa细胞对RES与GEM、BAM合用并不敏感,反而耐受。RES与BAM联合用药对小鼠体内H22移植瘤的抑制研究结果表明,RES(10mg／kg)、BAM(10 mg／kg)联合用药组与BAM(10 mg／kg)单药组相比较,小鼠瘤重有显著差异(P<0.05),联合用药指数CI值为0.73,具有协同增效作用。同时我们对NC0604抗肿瘤活性机制进行了初步探索,发现NC0604能损伤HepG2细胞DNA,通过影响调控细胞凋亡、存活的蛋白因子表达水平,来诱导细胞发生凋亡6.三种白藜芦醇衍生物抗肿瘤活性及联合用药初探白藜芦醇衍生物B1、B4、B5对HepG2细胞具有不同程度的生长抑制作用。其中B1、B4,尤其B4,抑瘤效果显著强于RES,具有进一步研究、开发的价值。接着我们将抑瘤效果相对较差的B1、B5与GEM、DNA损伤药物(BAM、NC0604、DOX)联合处理HepG2细胞,结果表明B1、B5与所选药物联合用药作用于HepG2细胞,合用效果均不理想。以上研究表明,白藜芦醇作为抗肿瘤化学增敏剂,具有潜在的临床应用价值。