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研究目的:
1.比较前体脂肪细胞组织块培养法和消化培养法的差异。
2.观察黄芩苷对前体脂肪细胞增殖、分化过程的影响。
3.观察黄芩苷对成熟脂肪细胞分泌细胞因子(脂联素、TNF-α)的作用,为黄芩苷防治与肥胖相关的代谢病提供理论上的依据。
研究方法:
1.采用组织块法和消化法培养原代大鼠前体脂肪细胞。
2.以后采用消化法培养大鼠前体脂肪细胞,将其接种到96孔培养板中培养至第3天,用不同浓度黄芩苷(0,5,10,20,60,80,100μg/ml)干预,在24,48,72 h3个时间点进行MTT测定。
3.24孔培养板中前体脂肪细胞培养至90%为成熟脂肪细胞,用不同浓度黄芩苷干预,在干预36,72h,观察黄芩苷对前体脂肪细胞充脂程度的影响。
4.采用油红O染色鉴定脂肪细胞。
5.用ELISA法测黄芩苷干预48h后细胞培养液中脂联素,TNF-α水平。
研究结果:
1.组织块法和消化法都能培养出前体脂肪细胞,但综合考虑消化法培养脂肪细胞效果较佳,所以本次实验均采用消化法培养。
2.黄芩苷明显抑制前体脂肪细胞分化。但低浓度(<20μg/ml)黄芩苷促进前体脂肪细胞增殖,高浓度(>20μg/ml)黄芩苷抑制前体脂肪细胞增殖。
3.0-60μg/ml黄芩苷干预组促进脂联素分泌,但80-100μ g/ml使脂联素分泌下降。
4.0-100μ g/ml黄芩苷可以抑制脂肪细胞分泌TNF-α,并且呈剂量浓度依赖性。
研究结论:
1.前体脂肪细胞原代培养采用消化法培养比较好,使用动物年龄以乳鼠为最佳。
2.黄芩苷在一定范围内抑制脂肪细胞增殖、分化,并与细胞生长时间和黄芩甘浓度成正比。
3.黄芩苷能升高保护性因子脂联素、剂量依赖性降低炎性因子 TNF-α的分泌,这些作用可能有益于其在防治肥胖相关的代谢病中的应用。