红树林土壤Streptomyces violaceoruber clade的选择性分离

来源 :华南热带农业大学 海南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chunyi19871225
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用五点采样法从福建九龙江口、广东湛江特呈岛及深圳福田、广西北海以及海南的三亚、儋州、清澜港、东寨港等8个地点的红树林采集了8份红树林土壤样品,利用链霉菌的系统发育特异引物对这8个地点的土壤样品提取的土壤总DNA进行了PCR扩增。对结果阳性的8个土样及它们的混合样,通过湿热、DDC(分散梯度离心)、风干等预处理方法将其在DH、RH、YE、Gause培养基上进行链霉菌及Streptomyces violaceoruber clade的分离。共分离到216株放线菌,对纯培养物进行发酵,发酵液作抗B16肿瘤细胞活性及抗MRSA活性测定,得到抗B16肿瘤细胞活性菌株46株,占总菌株数的21.30%,福建红树林分离到的微生物菌株数不仅多,而且活性菌株比率也较高。得到抗MRSA活性菌株25株,占总菌株数的9.72%,广东深圳红树林分离的MRSA菌活性菌株最多共6株,而且活性菌株比率也最高为27.27%。根据YE培养基上的培养特征对分离到的放线菌初步归类分群,结合测活结果选取28株菌作为代表菌株进行16S rDNA序列分析和细胞壁氨基酸糖份分析(薄板层析TLC),将分离到的放线菌鉴定到属,并构建系统发育树。28株放线菌分布在3个属,分别是:链霉菌属、野野村菌属、马杜拉放线菌属。分析不同预处理方法及分离培养基对分离结果的影响发现:DDC技术处理土样,分离到的菌株主要来自A部分;水浴加热预处理红树林样品时,条件为55℃,20min处理风干红树林土样分离效果好;RH培养基分离的菌株数最多,长出的放线菌多样并少有黄白色链霉菌长出;DH培养基适合于Streptomyces violaceoruber clade的选择性分离。Streptomyces violaceoruber clade宜在酸性环境下分离得到,在pH偏碱的环境中而难于分离到。用核糖核苷类合成酶基因、氨基糖苷类合成酶基因、聚酮合酶基因中的保守序列的特异引物分别对各个代表菌株进行PCR扩增,PCR扩增结果与测活结果比较显示:对某些酶扩增结果阳性的菌株,在抗肿瘤细胞或者抗MRSA未检测到活性。
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