论文部分内容阅读
肺腺癌是临床较为多见、预后较差、国内外同仁研究较多、预后评估较为困难的一类肿瘤，主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子链相关蛋白A/B(Major histocompatibilitycomplex classⅠ chain-related protein A/B，MICA/B)作为与肺癌关系正逐渐得到重视的一类肿瘤相关抗原，是否可作为肺腺癌的预后预测指标？及其与肺癌驱动基因表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor，EGFR)基因的关系如何？至今尚未揭晓。 目的： 利用小干扰RNA(Small interfering RNA，siRNA)技术探讨肺腺癌HCC827细胞EGFR基因与MICA/B表达的关系，检测晚期肺腺癌组织中MICA/B的表达并分析其与临床病理特征及预后的关系。 方法： 将规范培养的对数生长期肺腺癌HCC827细胞随机分为三组，EGFR-siRNA转染组、siRNA对照组借助于脂质体LipofectamineTM2000分别用EGFR-siRNA特异性转染试剂、siRNA对照试剂进行转染，空白对照组无转染，48小时后分别用逆转录聚合酶链式扩增反应、免疫印迹法、流式细胞仪检测三组EGFR mRNA、EGFR蛋白、MICA/B的表达。以2008年1月至2010年9月就诊于郑州人民医院、存档蜡块完好的126例晚期肺腺癌患者为受试者，经Excel表格采用双人双机平行录入、专人核对、及时备份的方法收集患者的姓名、年龄、性别、TNM分期、T分期、组织学分级、EGFR基因突变状态、淋巴结转移及穿刺标本MICA/B(免疫组化法染色，总积分0分为阴性表达，1分-2分为低表达，≥3分为高表达，非高表达包括阴性表达和低表达)表达、生存（至2015年9月30日随访截止）等情况，用SPSS20.0进行统计学分析。 结果： 1.EGFRmRNA和蛋白、MICA/B，三组表达的差异均存在统计学意义(P＜0.05），其中，EGFR-siRNA转染组低于siRNA对照组及空白对照组(P＜0.05），siRNA对照组与空白对照组EGFR mRNA和蛋白的差异无统计学意义(P＞0.05)。1.5％琼脂糖凝胶电泳EGFR mRNA发现，空白对照组和siRNA对照组光密度相仿，且明显强于EGFR-siRNA转染组;EGFR蛋白电泳显示，EGFR-siRNA转染组蛋白条带相比于空白对照组和siRNA对照组颜色变浅、宽度变细。 2.MICA/B表达于肺腺癌组织的胞质、胞膜，高表达率约为48.41％(61/126)。 3.不同性别、年龄患者MICA/B高表达率的差异无统计学意义(P＞0.05)，不同T分期、TNM分期、组织学分级、EGFR基因突变状态、淋巴结转移患者MICA/B的高表达率存在统计学差异(P＜0.05）。MICA/B表达，与组织学分级呈负相关，与T分期、TNM分期、EGFR基因突变状态、淋巴结转移呈正相关(P＜0.05）。 4.单因素生存分析显示:T分期、TNM分期、组织学分级、EGFR基因突变状态、淋巴结转移、MICA/B表达强度是晚期肺腺癌患者预后的可疑影响因素(P＜0.05），而年龄、性别尚不能作为晚期肺腺癌患者预后的影响因素(P＞0.05);多因素生存分析显示:EGFR基因突变状态(HR=1.965，=0.027)、MICA/B(HR=3.058，P=0.002)表达强度是晚期肺腺癌患者预后的独立影响因素(P＜0.05)。 结论： MICA/B与EGFR基因及晚期肺腺癌的发展有关，MICA/B高表达、EGFR突变是影响晚期肺腺癌预后的独立危险因素。