RNA干扰技术抑制胃癌细胞SGC-7901中Nanog表达的实验研究

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目的:利用RNA干扰技术构建并筛选出对Nanog基因有抑制作用的重组质粒pshRNA-Nanog,将其转染入胃癌细胞SGC-7901中,检测胃癌细胞SGC-7901中Nanog的表达,及其对胃癌细胞SGC-7901的增殖、周期、凋亡、迁移及侵袭等生物学行为的影响,为胃癌的基因诊断和治疗研究奠定基础。方法:(1)针对人Nanog基因构建出的干扰质粒pshRNA-Nanog,在脂质体的介导下将其转染胃癌细胞SGC-7901,通过荧光显微镜观察其表达情况,通过RT-PCR和Western blot检测其抑制效率,筛选出抑制率最高的一组;(2)将筛选出的转染效率最高的那组pshRNA-Nanog重组质粒用脂质体转染胃癌细胞SGC-7901中,通过CCK-8检测其对胃癌细胞SGC-7901增殖情况的影响,通过流式细胞仪对胃癌细胞SGC-7901的周期及凋亡情况进行检测,使用Transwell法验证胃癌细胞SGC-7901的迁移能力及侵袭能力。结果:(1)成功构建出重组质粒pshRNA-Nanog并成功转染胃癌细胞SGC-7901,荧光显微镜下可观察到细胞中的绿色荧光,通过RT-PCR及Western Blot实验显示Nanog基因的表达有降低,并筛选出了对胃癌细胞SGC-7901抑制率最高的一组pshRNA-Nanog重组质粒;(2)CCK-8显示胃癌细胞SGC-7901的增殖能力减弱,流式细胞术示细胞周期停滞在S期,凋亡细胞明显增多,Transwell迁移实验显示胃癌细胞SGC7901的迁移能力减弱,侵袭实验显示胃癌细胞SGC-7901的侵袭能力减弱。结论:pshRNA-Nanog转染了胃癌细胞SGC-7901后,使细胞增殖受到明显抑制,细胞周期停滞在S期,凋亡细胞明显增多,细胞的迁移和侵袭能力减弱,由此可见,Nanog基因与胃癌细胞SGC-7901的周期、凋亡、增殖、迁移能力以及侵袭能力有密切的关系。
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