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肿瘤在各种人类疾病中一直是严重影响人类健康与生活的恶性疾病之一。其中恶性肿瘤（癌）严重威胁人类生命及生活质量并可导致致命的并发症，所以一直是医学研究中的重点之一。头颈肿瘤占所有肿瘤发生率3%，死亡率约占所有肿瘤的1.3%，其中大部分约80-85%的病理类型为鳞状细胞癌。所以在头颈肿瘤的研究中，在分子生物学水平上研究鳞状细胞癌中癌基因、抑癌基因的相互作用关系及相关作用蛋白已成为研究肿瘤发病机制及基因治疗的主要方向之一。CDK2-AP1（cyclindependent kinase2associating protein1）基因是通过在利用核酸杂交技术在仓鼠口腔颊癌模型中发现、分离并证实的一个候选抑癌基因。P12CDK2-AP1蛋白是CDK2-AP1基因表达蛋白。P12CDK2-AP1可以抑制CDK2活性而影响肿瘤细胞生长并使癌细胞的表型发生一定的改变，但其具体的机制目前并没有完全阐明。本研究通过研究p12CDK2-AP1相互作用蛋白UPP来研究其在人类口腔鳞癌细胞中的机理。目的：1．通过pull-down和CO-IP实验验证p12CDK2-AP1与UPP蛋白相互作用结果。2．通过p12CDK2-AP1沉默与过表达，研究p12CDK2-AP1与UPP基因的表达情况。3．通过荷瘤动物试验研究p12CDK2-AP1及UPP蛋白对肿瘤生长的生物学作用。方法：1．使用pGEX4T-1质粒，分别构建GST-p12CDK2-AP1与GST-UPP融合蛋白，使用BL21缺陷表达菌，体外表达融合蛋白。GST-UPP蛋白使用凝血酶切除GST标签，后使用GST亲合层析纯化融合蛋白后行pull-down试验，使用SDS-PAGE验证p12CDK2-AP1与UPP存在相互作用。2．使用真核质粒pCDNA3.1，使用HA及FLAG蛋白表达标签，分别构建pCDNA3.1-HA-p12CDK1AP1及pCDNA3.1-FLAG-UPP表达质粒。经测序正确后，分别转染至293T细胞中，培养48小时后，使用Omega免疫共沉淀试剂盒，验证在真核细胞中p12CDK2-AP1与UPP存在相互作用。3．使用p12CDK2-AP1siRNA寡核苷酸使用Lipofectimne2000转染至293T细胞中，转染48小时后，收获细胞后，提取总RNA，反转合成CDNA后，使用QuantitativeReal Time PCR和Western Blot分析p12CDK2-AP1沉默效果后，测定UPP表达情况。4．在293T细胞中过表达p12CDK2-AP1基因后，使用Quantitative Real Time PCR测定UPP基因表达情况。5．使用SBI公司慢病毒过表达载体，构建pCDH-GFP-p12CDK2-AP1慢病毒，使用293TN病毒包装细胞包装病毒后，感染TCA-8113细胞48小时，培养4天后，使用流式细胞仪筛选阳性转染TCA-8113细胞，培养三周后。以稳定转染UPP基因的TCA-8113细胞1×105注射裸鼠右侧腋下皮内，以末转染的TCA-8113细胞为对照，待肿瘤成长为1-3mm3时收获肿瘤，测量肿瘤大小与重量。结果：1.经过pull-down和Co-IP实验，验证了p12CDK2-AP1与UPP蛋白存在直接的相互作用。2.沉默p12CDK2-AP1基因后，Quantitative Real Time PCR检测到UPP基因的表达明显下调。而过表达p12CDK2-AP1基因后，可发现Quantitative Real Time PCR检测到UPP基因的表达明显上调。3.在293T细胞中过表达UPP基因后，发现细胞周期中G2/M期明显降低。4.荷瘤小鼠发现稳定转染UPP基因后可明显减小转移瘤大小和转移瘤重量。结论：1.通过本实验，验证了p12CDK2-AP1与新结合UPP蛋白存在相互作用。2. P12CDK2-AP1可上调及下降UPP基因的表达，UPP基因为p12CDK2-AP1抑癌基因的下游而发挥生物学功能。3.通过裸鼠荷瘤实验，证实UPP基因可明显抑制转移瘤的生长。